Тест с ответами. Физиология возбудимых тканей.

Описание

Итоговый тест по разделу возбудимые ткани

1. Выберите вторичный мессенджер, образование которого катализирует аденилатциклаза.

2. Выберите вторичный мессенджер, образование которого катализирует гуанилатциклаза.

3. Выберите ключевой белок в реализации кальциевого сигнала в возбудимых клетках

4. Что является лигандом для NMDA-рецепторов

5. В чём заключается особое значение липидов для возбудимых клеток

— Липиды обеспечивают генерацию потенциала действия

— Липиды обеспечивают изолирующую функцию

— Липиды входят в состав ионных каналов клеточных мембран

6. Способность живой ткани реагировать на любые виды раздражителя носит название

7. Способность возбудимых тканей приходить в состояние возбуждения без внешних стимулов носит название

8. Раздражитель, к действию которого рецептор приспособлен в процессе эволюции, называют

9. Минимальная сила раздражителя, необходимая и достаточная для вызова ответной реакции возбудимой ткани, называется

10. Не требующий затраты энергии механизм движения ионов через мембрану по градиенту концентрации называется

11. К пассивному транспорту относятся все виды за исключением

12. На скорость пассивной диффузии через клеточную мембрану влияют все факторы за исключением

— растворимости в липидах

13. Механизм движения ионов через мембрану против градиента концентрации, с затратой энергии, называется

14. К активному транспорту относится все виды за исключением

— с участием переносчиков

15. Какой вид ионного канала блокируется тетраэтиламмонием и 4-аминопиридином

16. Какой вид ионного канала блокируется тетродотоксином и местными анестетиками

17. Молекулярный механизм, обеспечивающий выведение из цитоплазмы ионов натрия и введение туда ионов калия, называют

— критическим уровнем деполяризации

— натриевым селективным каналом

18. Выберите наиболее правильный ответ. Встроенная в клеточную мембрану белковая молекула, обеспечивающая избирательный переход данных ионов через мембрану с затратой энергии, это

— неспецифический ионный канал

— специфический ионный канал

19. Какое химическое соединение тормозит работу натрий-калиевого насоса

20. Какой ион участвует в котранспорте глюкозы

21. Внутренняя поверхность мембраны клетки по отношению к наружной в состоянии физиологического покоя заряжена

22. В цитоплазме нервных и мышечных клеток по сравнению с внеклеточной средой выше концентрация ионов

23. Во внеклеточной среде по сравнению с цитоплазмой выше концентрация

24. Разность потенциалов между внутренней и наружной поверхностью мембраны клетки в покое называется

— мембранным потенциалом покоя

25. Формирование мембранного потенциала происходит при обязательном участии всех механизмов, кроме

— разной концентрации ионов снаружи и внутри клетки

— разной проницаемости мембраны для ионов калия, натрия

— наличия вторично-активного транспорта

26. Уменьшение мембранного потенциала называется

27. Увеличение мембранного потенциала называется

28. Какой тип каналов вносит ключевой вклад в формирование величины мембранного потенциала покоя

— неуправляемые каналы утечки

29. Что произойдет с потенциалом покоя возбудимой клетки при повышении концентрации калия во внеклеточной среде

30. В каком диапазоне наиболее часто находится величина мембранного потенциала различных типов возбудимых клеток

31. Для каких ионов мембрана мышечного волокна малопроницаема в покое

32. Для каких ионов мембрана мышечного волокна высокопроницаема в покое

33. Выберите наиболее правильный ответ. Биологический процесс, характеризующийся временной деполяризацией мембраны клетки с последующим развитием конечного биологического эффекта клетки, называется

34. К возбудимой ткани относится

35. К возбудимой ткани относится

36. Минимальная сила раздражителя, необходимая и достаточная для развития ответной реакции возбудимой ткани в виде потенциала действия, называется

37. Сила раздражителя, достаточная для развития реакции возбудимой ткани в виде локального ответа, называется

38. Уровень деполяризации мембраны, необходимый для развития потенциал действия, называется

— критическим уровнем деполяризации

39. В фазу деполяризации потенциала действия (восходящая фаза) проницаемость мембраны увеличивается для ионов

40. Фаза реполяризации потенциала действия (нисходящая фаза) связана с повышением проницаемости для ионов

41. Закон, согласно которому возбудимая структура на пороговые и сверхпороговые раздражения отвечает максимально возможным ответом, называется

— закон «всё или ничего»

42. Амплитуда потенциала действия по мере его распространения по нервному волокну

43. Какая фаза возбудимости соответствует деполяризации во время потенциала действия

44. Может ли клетка ответить возбуждением на дополнительное раздражение в период абсолютной рефрактерности

— В зависимости от исходного состояния

45. Может ли клетка ответить возбуждением на дополнительное раздражение в период относительной рефрактерности

— Да, при действии сверхпорогового раздражителя

— Да, при действии порогового раздражителя

46. Период повышенной возбудимости клетки в фазу следовой деполяризации называют

47. Какая фаза возбудимости соответствует фазе следовой гиперполяризации потенциала действия

48. Какая зависимость между величиной пороговой силы раздражителя и возбудимостью клетки

49. Наименьшую продолжительность времени, в течение которого должен действовать ток в одну реобазу (пороговое значение тока), чтобы вызвать возбуждение клетки, называют

50. Наименьшую продолжительность времени, в течение которого должен действовать ток в 2 реобазы (в 2 раза больше порогового), чтобы вызвать ответ возбудимой клетки, называют

51. Приспособление ткани к медленно нарастающему по силе раздражителю, называют

52. Чем изолированы друг от друга безмякотные нервные волокна

— Только шванновскими клетками

— Миелиновой оболочкой и шванновскими клетками

53. Что выполняет изолирующую и трофическую функции в миелинизированном нервном волокне периферических нервов

54. Открытый участок мембраны осевого цилиндра шириной около 1 мкм, в котором миелиновая оболочка прерывается, называется

55. Чем обусловлена высокая возбудимость в перехватах Ранвье

— Высокой плотностью натриевых каналов

— Высокой плотностью кальциевых каналов

— Низкой плотностью натриевых каналов

— Высокой плотностью калиевых каналов

56. Какие типы нервных волокон имеют миелиновую оболочку в соответствии с классификацией Эрлангера-Гассера

57. Какой характер связи между скоростью проведения возбуждения и диаметром нервного волокна

58. Как связана скорость развития утомления с диаметром нервных волокон

— Тонкие нервные волокна утомляются быстрее

— Более толстые нервные волокна утомляются быстрее

59. В каком направлении течёт локальный ток по поверхности нервного волокна при возбуждении какого-то его участка

— От возбуждённого участка к невозбуждённому (от «- » к «- »)

— От невозбуждённого участка к возбуждённому (от «- » к «-»)

60. Возбуждение в безмиелиновых нервных волокнах распространяется

61. Возбуждение в миелинизированных нервных волокнах распространяется

62. Чем характеризуется сальтаторное (скачкообразное) проведение возбуждения в мякотных нервных волокнах

— увеличением скорости проведения потенциала действия

— уменьшением амплитуды потенциала действия

— увеличением амплитуды потенциала действия

— уменьшением скорости проведения потенциала действия

63. Что означает выражение «нарушение физиологической непрерывности нервного волокна»

— нарушение проведения импульса вследствие воздействия механических, химических или термических факторов

— нарушение проведения импульса в результате разрыва нервного волокна при травме, оперативном вмешательстве

64. Возможно ли проведение нервных импульсов по нервному волокну при полной блокаде натриевых каналов местными анестетиками или тетродотоксином

— В зависимости от исходного состояния мембраны

65. В каком типе мышечной ткани более выражено свойство пластичности

67. Выбрать три признака малых двигательных единиц

— быстрая реакция на раздражение

— расположение в крупных мышцах

— обеспечение точных движений

— высокая плотность нервных волокон на небольшом количестве мышечных волокон

68. Выбрать три признака больших двигательных единиц

— быстрая реакция на раздражение

— расположение в крупных мышцах

— обеспечение точных движений

— обеспечение движений, не требующих тонкого контроля

— невысокая плотность нервных волокон на небольшом количестве мышечных волокон

69. Структурное образование, обеспечивающее передачу возбуждения с нейрона на эффекторную клетку, носит название

70. Клеточная мембрана в области синапса, покрывающая нервное окончание, называется

71. Выберите наиболее правильный ответ. Пресинаптические структуры аксона включают

— мембрану аксона с кальциевыми каналами, синаптические пузырьки

— мембрану эффекторной клетки с кальциевыми каналами и рецепторами к медиатору

— мембрану аксона с ионными потенциалуправляемыми каналами

72. Что называют концевой пластинкой мышечного волокна в нервно-мышечном синапсе

— постсинаптическую мембрану синапса

— двигательное нервное окончание

— двигательное нервное волокно

— пресинаптическую мембрану синапса

73. Какие типы ионных каналов содержит постсинаптическая мембрана нервно-мышечного синапса

74. Закончите утверждение. На постсинаптической мембране нервно-мышечного синапса возникает

— потенциал концевой пластинки

— тормозящий постсинаптический потенциал

— возбуждающий постсинаптический потенциал

75. К какому типу электрофизиологических ответов на раздражение относят потенциалы концевой пластинки мышечного волокна

— К локальному ответу

— К электротоническому потенциалу

— К тормозному постсинаптическому потенциалу (ТПСП)

— К распространяющемуся потенциалу действия

76. Медиатором в нейромышечных синапсах скелетных мышц человека является

77. Какова судьба основной части холина в синаптической щели после расщепления ацетилхолина ацетилхолинэстеразой

— Захватывается обратно в нервную терминаль

— Связывается с холинорецепторами постсинаптической мембраны

— Диффундирует в мышечную клетку

78. Какой фермент, разрушающий ацетилхолин, обнаруживается в синаптической щели

79. Какие рецепторы инициируют потенциал действия мышечного волокна скелетных мышц

80. Амплитуда потенциала концевой пластинки мышечного волокна в области нервно-мышечного синапса

— не зависит от количества высвобождаемого нейромедиатора

— зависит от количества высвобождённого нейромедиатора

81. Что из перечисленного утомляется быстрее

82. Какая из перечисленных структур наиболее устойчива к утомлению

83. Каков механизм блокады проведения возбуждения через синапс ядом кураре

— Образование прочного соединения с холинорецепторами

— Блокада высвобождения нейромедиатора из нервного окончания

84. Каков механизм действия яда ботулинического токсина на синаптическую передачу

— Блокада высвобождения нейромедиатора из нервного окончания

— Ингибирование фермента ацетилхолинэстеразы

— Образование прочного соединения с холинорецепторами

85. Ключевую роль в процессе электромеханического сопряжения при мышечном сокращении осуществляют

86. Толстые филаменты в саркомере сформированы молекулами

87. Выберите наиболее полный ответ. Тонкие филаменты в саркомере сформированы молекулами

— тропомиозина, тропонина, актина

— миозина, тропомиозина, небулина

— актина, тропомиозина, тропонинов C, T, I

88. Где в покое в мышечном волокне наибольшая концентрация ионов кальция

— В цистернах саркоплазматического ретикулума

89. Из саркоплазматического ретикулума мышечной клетки при возбуждении высвобождаются ионы

90. Выделение ионов кальция из саркоплазматического ретикулума возникает при активации

— рианидиновых рецепторов саркоплазматического ретикулума

— холинорецепторов мышечного волокна

— дигидропиридиновых рецепторов Т-трубочек

91. В процессе мышечного сокращения ионы кальция взаимодействуют с

92. С каким белком непосредственно связываются ионы кальция в мышечном волокне

93. Поперечные мостики в саркомере представлены

94. Что обладает АТФ-азной активностью в структуре сократительных белков мышечной клетки

95. Укажите, какой процесс характеризует скольжение филаментов мышечного волокна друг относительно друга

— конформационные изменения миозиновых мостиков

— связывание ионов кальция с тропонином

— выход ионов кальция из цистерн саркоплазматического ретикулума

— проведение возбуждения в виде потенциала действия по клеточной мембраны

96. Для отсоединение головки миозина от актиновой нити необходимо наличие

97. С чем связано трупное окоченение мышц

— c падением концентрации АТФ в мышце ниже критической величины

— c уменьшением количества белков

— c понижением температуры тела умершего

— с недостатком ионов кальция

98. Как называют явление увеличения амплитуды одиночного сокращения мышцы при росте частоты стимуляции этой мышцы

99. Сокращение одиночного мышечного волокна подчиняется закону

100. Сокращение целой мышцы подчиняется закону

101. Выберите правильную последовательность смены режима мышечных сокращений при увеличении частоты раздражения

102. Выберите правильную последовательность фаз одиночного мышечного сокращения.

103. В какую фазу одиночного сокращения поперечнополосатого мышечного волокна заканчивается потенциал действия

— В латентный период

— В фазу расслабления

104. Сокращение мышцы, возникающее при раздражении серией импульсов, в которых интервал между импульсами больше, чем длительность одиночного сокращения, называется

105. Характер сокращений мышцы в результате раздражения серией сверхпороговых импульсов (т.е. высокой частоты), каждый из которых действует в фазу расслабления, называется

106. Характер сокращений мышцы в результате раздражения серией сверхпороговых импульсов (высокой частоты), каждый из которых действует в фазу укорочения, называется

107. В эксперименте получен зубчатый тетанус. Как нужно изменить частоту раздражения, чтобы получить гладкий тетанус

110. Сокращение мышцы, при котором не происходит изменения ее длины, называется

111. Чем характеризуется изометрическое сокращение мышцы

— мышечные волокна укорачиваются, а напряжение остаётся постоянным

— мышечные волокна не укорачиваются, но напряжение возрастает

112. Чем характеризуется изотоническое сокращение мышцы

— мышечные волокна укорачиваются, но напряжение остаётся постоянным

— мышечные волокна не укорачиваются, а напряжение мышцы возрастает

113. Как называют метод регистрации электрической активности целой скелетной мышцы

Источник

Молекулярная специфика в перехватах Ранвье

Organization and function of the nodal environs

Скоординированная дифференцировка аксона и его миелинизирующих клеток требует тесной взаимосвязи между нейронами и глией на самых ранних стадиях развития. Сигналы, передаваемые аксоном, регулируют пролиферацию, выживаемость и дифференцировку олигодендроцитов и Шванновских клеток и участвуют в детерминации толщины миелина. Реципрокные глиальные сигналы влияют на цитоскелет аксонов и аксонный транспорт и необходимы для выживаемости аксонов. В результате таких реципрокных связей миелинизированные волокна приобретают структурные признаки, позволяющие им максимизировать скорость проведения импульса. Одним из таких признаков является разделение мембраны аксона на отдельные молекулярные, структурные и функциональные домены. Такие домены включают перехваты Ранвье, paranodal junction (околоузловое соединение), juxtaparanodes (участок, расположенный за paranodal junction ) и internodal (межперехватный участок (РИС.1b и 2). Авторы сфокусировали внимание на молекулярных механизмах, лежащих в основе образования и поддержания этих уникальных доменов аксона, необходимых для нормального функционирования нервной системы.

The node of Ranvier

Узловые перехваты Ранвье представляют собой небольшие по длине, равномерно расположенные разрывы миелиновой оболочки. Интервал между перехватами Ранвье имеет длину примерно в 100 раз большую диаметра нервного волокна. Имеются некоторые различия в структурных характеристиках перехватов между центральной и периферической нервными системами. В периферических нервах весь миелинизированный участок аксона покрыт базальной оболочкой (базальным слоем) (basal lamina), а внешний слой (outer collar) шванновской клетки имеет микроворсинки, покрывающие узловые перехваты (РИС. 1b). Околоузловое пространство (т.е. пространство между аксолеммой и базальным слоем), содержащее микроворсинки, также заполнено волокнистым матриксом. В ЦНС нет basal lamina и контакт перехватов осуществляется через околоузловые астроциты (perinodal astrocyte=перинодальные астроциты), которые недавно были названы синантоцитами (synantocytes) [Butt, A. M., Kiff, J., Hubbard, P. & Berry, M. Synantocytes: new functions for novel NG2 expressing glia. J. Neurocytol. 31, 551-565. 2002].

Cytoskeletal proteins.Перехваты и начальный сегмент аксона обогащены ankyrin G – мембранно-цитоскелетным адаптером, связывающим интегральные мембранные белки с spectrin cytoskeleton. Ankyrin G взаимодействует с Na+ каналами – с их α- и β-субъединицами, а также с Nf 186, Nrcam и Kv3.1. β-субъединица «вербует» ankyrin G для плазменной мембраны и такое взаимодействие регулируется tyrosine phosphorylation. Связывание ankyrin G с α-субъединицей осуществляется через последовательность девяти аминокислот, присутствующих во всех известных voltage-gated Na+ каналах. Такой девяти-аминокислотный лейтмотив необходим для аккумуляции α-субъединицы в начальном сегменте аксона. Более того, такой ankyrin-binding сайт локализован в пределах короткой последовательности, которой достаточно, чтобы таргетировать белки для начального сегмента аксона. Остается определить, нужна ли эта короткая последовательность для таргетирования перехватов Ранвье. Связывание ankyrin G с двумя перехватными Ig-CAMs, Nf186 и Nrcam опосредуется группой из двенадцати аминокислот, найденной в их цитоплазматических доменах. Ankyrin G связывается с этими группами только тогда, когда он дефосфорилирован, указывая на то, что неидентифицируемые тирозин киназы и фосфатазы могут регулировать такое взаимодействие. Tyrosine-phosphorylated neurofascin локализован в глиальных параузлах (paranodes), а не в перехватах, свидетельствуя в пользу гипотезы, согласно которой перехватный neurofascin тесно связан с ankyrin G. Ankyrin G также связывает spectrin βIV – spectrin изоформу, присутствующую в изобилии в перехватах Ранвье и начальных сегментах аксонов – связывая в дальнейшем узловые Na + каналы и Ig-CAMs с цитоскелетом аксона.

The nodal gap, extracellular matrix and the glial membrane В ПНС узловой пробел (перехват) заполнен микроворсинками Шванновских клеток, происходящими из наружной оболочки клетки (РИС.1b). В проксимальной области микроворсинок мембраны двух соседних Шванновских клеток соединены tight junctions (плотным соединением), но эти соединения не изолируют узелковый пробел. Было обнаружено, что они проницаемы для пероксидазы хрена, прикладываемой снаружи нервного волокна. Три белка – erzin, radixin и moesin, так же как и erzin-связывающий белок EBP50 и Rho-AGTPasa локализованы в микроворсинках. Потенциально эти белки могут связывать актин-обогащенные микроворсинки с интегральными мембранными белками (integral membrane proteins). Кроме того, несколько белков внеклеточного матрикса (extracellular matrix (ECM) proteins) найдено в узловых пробелах под базальной оболочкой, включая hyaluronan-binding proteoglycan versican, tenascin-C и NG2 proteoglycan. Недавно было показано, что dystroglycan в избытке экспрессирующийся на abaxonal поверхности миелинизирующих Шванновских клеток также локализуется в перехватах. Специфическое удаление dystroglycan в Шванновских клетках приводит к дезорганизации микроворсинок, заметной редукции узловых Na+ каналов и к последующему нарушению проводимости нервного волокна.
В отличие от ПНС, в ЦНС отростки перинодальных астроцитов (perinodal astrocytes) (РИС.1b) контактируют с большинством узловых перехватов. Было показано, что узловой пробел в ЦНС включает несколько протеогликанов, в том числе tenascin и phosphacan. Узловые пробелы ЦНС также содержат versican-binding protein Bral1, продуцируемый нейронами. Функции этих белков пока неясны, однако предполагают, что благодаря высокому содержанию в них acidic disaccharides, они могут обеспечивать негативную среду, служащую в качестве внеклеточного резервуара Na+ в перинодальном пространстве. И tenascin-C, и tenascin-R связываются с Na+ каналами и изменяют их электрофизиологические свойства. Генетическое удаление tenascin-R ведет к снижению нервной проводимости, но не оказывает никакого эффекта на распределение Na+ каналов в узловых перехватах, указывая на то, что такое взаимодействие может стабилизировать узловые комплексы или регулировать активность каналов, но не требуется для первичной кластеризации этих каналов. Сообщалось также, что Na+ каналы связывают цитоплазматический конец (tail) и внеклеточный домен Rptpβ – рецепторную тирозин фосфатазу, о локализации которой в узловой аксолемме (nodal axolemma) пока не сообщалось. Более того, значимость этих взаимодействий для нормальной физиологии миелинизированных нервов пока неясна, т.к. распределение узловых Na+ каналов и скорость проводимости миелинизированных аксонов в ЦНС нормальны у Rptpβ-дефицитных мышей. Стоит отметить, что и tenascin-R, и Rptpβ также взаимодействуют с contactin и Nrcam, присутствующими в узловых перехватах ЦНС, указывая на возможное присутствие крупных макромолекулярных комплексов в перинодальном пространстве.

The axoglial paranodal junction

Morphology and molecular composition. C обеих сторон перехватов Ранвье компактная миелиновая оболочка раскрывается и формирует заполненные цитоплазмой глиальные петли (glial loops), которые спирально наматываются вокруг аксона (РИС.1b). Такие паранодальные петли соединены с аксолеммой серией перемычек (поперечных полосок – transverse bands), которые напоминают septate junctions (перегородчатые соединения) у беспозвоночных (BOX1). Аксоглиальные соединения появляются относительно поздно во время миелинизации – сначала они образуются ближе к перехватам наиболее отдаленной паранодальной петлей и постепенно распространяются по мере того, как дополнительные петли прикрепляются к аксону. В итоге, они состоят из множества колец, каждое из которых представляет собой виток миелиновой оболочки.
Мембрана аксона в месте аксоглиального соединения содержит комплекс из двух cell-recognition молекул — contactin-associated protein (Caspr, также известные как paranodin) и contactin (РИС.2b). Caspr является трансмембранным белком типа I, принадлежащим к отдельной подгруппе neurexins – полиморфного белкового семейства, участвующего в клеточной адгезии и межклеточных связях. У человека известно 5 генов семейства Caspr – CASPR1–CASPR5 (Spiegel, I., Salomon, D., Erne,et. al. Caspr3 and caspr4, two novel members of the caspr family are expressed in the nervous system and interact with PDZ domains. Mol. Cell. Neurosci. 20, 283-297. 2002). У дрозофилы известно 2 гена – nrxIV и axo и у Caenorhabditis elegans также 2 гена – itx-1 и nlr-1 [L. Haklai-Topper and E.P., unpublished observations]. Эти белки связывают некоторые CAMs и, следовательно, могут рассматриваться как CAM-ассоциированные белки. Их внеклеточная область состоит из нескольких доменов, участвующих в межбелковых взаимодействиях, включая discoidin и fibrinogen-like domain, epidermal growth factor (EGF) motifs, и несколько областей гомологичных G домену laminin A (BOX 1). Caspr, но не другие члены семейства Caspr, формирует комплекс с contactin только в cis. Взаимодействие между Caspr и contactin необходимо для эффективного экспорта Caspr из эндоплазматического ретикулума к плазменной мембране, оно регулирует glycosylation и транспорт contactin. Caspr и contactin связаны в эндоплазматическом ретикулуме и могут быть транспортированы через Гольджи-независимый путь (Golgi-independent pathway) к клеточной поверхности. Так же как и при исследовании in vitro, у contactin-дефицитных мышей Caspr сохраняется в теле нейрона и не достигает аксона (Boyle, M. E. et al.2001), но Caspr необходим для поддержания contactin в paranodes (Gollan, L. et al. Retention of a cell adhesion complex at the paranodal junction requires the cytoplasmic region of Caspr. J. Cell Biol. 157, 1247-1256 (2002). Shows that the stabilization of the Caspr/contactin complex at the cell membrane requires the intracellular region, which includes the protein 4.1B-binding domain).
И Caspr, и contactin важны для образования axoglial junction (аксоно-глиального соединения) и их отсутствие ведет к исчезновению септ (перемычек) и расширению пространства между аксоном и паранодальными петлями. Результаты указывают, что Caspr и contactin могут быть частью paranodal adhesion complex, который необходим для плотного соединения двух оболочек. Фенотип contactin-дефицитных мышей сходен с фенотипами двух других паранодальных мутантов – galactolipids-дефицитными мышами, у которых отсутствует UDP-galactose ceramide galactosyltransferase (Cgt) и не синтезируются galactocerebroside (GalC) и sulfatide и cerebroside sulfotransferase ( Cst)-null мышами, у которых отсутствует синтез только sulfatide. У всех этих мутантов Caspr и contactin отсутствуют в paranodes. Путь, при котором отсутствие GalC и sulfatide вызывает паранодальные аномалии, неясен, но можно предположить, что это результат прямого связывания sulfatide с Caspr/contactin комплексом. И, напротив, говоря о роли galactolipids в формировании LIPLD RAFTS (липидных плотиков) и организации миелина, можно предположить, что их отсутствие может привести к превращению junctional glial компонентов в не-компактный миелин. Последнее предположение подтверждается недавними находками, показавшими, что генетическое удаление миелинового и лимфоцитарного (myelin and lymphocyte – MAL) белка, – raft-ассоциированной молекулы, участвующей во внутриклеточном трафике, – ведет к паранодальным аномалиям (N. Schaeren-Wiemers and U. Suter, personal communication).
Внутриклеточные области Caspr и Caspr2 содержат juxtamembrane последовательность, которая связывает protein 4.1B, присутствующий в paranodes и juxtaparanodes. Как и другие 4.1 белки, 4.1В белок содержит консервативный actin–spectrin-binding домен и, следовательно, может связывать Caspr (и следовательно contactin) с цитоскелетом. В соответствии с этой гипотезой, protein 4.1B аномально распределяется вдоль периферических миелинизорованных аксонов у мышей с отсутствием либо contactin, либо galactolipids, у которых отсутствуют паранодальные Caspr. У этих мутантов местоположение белка 4.1В коррелирует с положением Caspr и Caspr2, указывая на то, что они могут определять его локализацию. Более того, цитоплазматический конец Caspr нужен для стабилизации Caspr/contactin комплекса в paranodes, т.к. у Caspr мутантов с отсутствием этого домена не сохраняется axoglial junction. Поэтому, вероятно, что Caspr является трансмембранным скаффолдом, который стабилизирует Caspr/contactin adhesion complex в septate-подобных соединениях связывая комплекс с аксонным цитоскелетом через белок 4.1В. Этот механизм напоминает функцию neurexin IV Drosophila, который захватывает Coracle (гомолог белка 4.1) для septate junctions (BOX 1). Кроме того, цитоплазматический Caspr также связывает FERM domain (four-point-one, ezrin–radixin–moesin)-содержащий белок Schwanomin/merlin. Однако значение такого взаимодействия не совсем ясно, поскольку Schwanomin не концентрируется в области паранодального соединения.
Распределение Caspr и contactin вдоль internodes (межперехватов) (см. далее в тексте), их накопление в paranodes (как число колец, представляющих витки миелиновой обертки во время развития), аномальное распределение Caspr при рассеянном склерозе и у некоторых «миелиновых» мутантов указывают на то, что миелиновая оболочка определяет локализацию Caspr и contactin в аксолемме. Более того, добавление растворимого Rptpβ, связывающего contactin с myelinating co-cultures, нарушает паранодальное накопление Caspr, указывая на то, что локализация Caspr/contactin complex в этом участке может быть опосредована его взаимодействием с глиальным лигандом. Наиболее подходящим кандидатом глиального лиганда для Caspr/contactin complex является Nf155 – глиальная изоформа CAM neurofascin, который локализован вместе с Caspr и contactin в месте аксоглиального соединения (axoglial junction) и не локализуется в этом участке в отсутствии Caspr. В подтверждение этой гипотезы недавно появилось сообщение, что soluble Nf155-Fc chimaera связывается с клетками, экспрессирующими Caspr и contactin, а преципитация этих белков из лизатов мозга крыс указывает на то, что Nf155 может служить в качестве рецептора для Caspr/contactin complex. Однако последние сообщения подвергли сомнению данную модель, так как было показано, что когда Nf155 связывается непосредственно с contactin, то Caspr подавляет такое взаимодействие. Это указывает на возможное существование других рецепторов для Caspr/contactin complex в миелинизирующей глии. Это наблюдение согласуется с предыдущими сообщениями, показавшими, что Nf155 в paranodes появляется намного позже, чем Caspr.

Function of the paranodal junction. Предполагают, что paranodal junction присоединяет миелиновую оболочку к аксону, чтобы отделить электрическую активность в перехватах Ранвье от межперехватного участка (internodal region), находящегося под компактной миелиновой оболочкой, и служит в качестве преграды (fence), которая ограничивает латеральную диффузию белков аксолеммы. Недавние исследования с использованием 4-х паранодальных мутантных мышей – мышей с отсутствием Caspr, contactin, Cgt и Cst, (все с отсутствием характерной перегородки (septa) в аксоглиальном соединении) – позволили прекратить проверку этих оригинальных идей. В ЦНС этих мутантов паранодальные петли (paranodal loops) дезорганизованы, имеется множество перекрывающихся и инвертированных петель, обращенных в сторону от аксона. В ПНС этих мутантов морфологические изменения менее выражены, возможно, благодаря присутствию базального слоя (basal lamina). Параузлы (paranodes) хорошо организованы, однако увеличено пространство между глиальной оболочкой и аксоном. Но даже в отсутствие перегородки (septa) паранональные петли (loops) все еще тесно прикреплены к аксону во многих участках ЦНС и ПНС, указывая на присутствие до сих пор не идентифицированных паранодальных компонентов, которые опосредуют аксо-глиальный контакт в этом участке. Вместе с электронно-микроскопическими данными, показавшими, что поперечные соединения (transverse bands) образуются позже во время миелинизации, эти исследования указывают на возможную роль перегородки (septa) в сохранении паранодальных петель (колец) для аксона в аксоглиальном соединении. В соответствии с этими наблюдениями, постепенное, зависимое от возраста открепление паранодальных колец от аксона наблюдали в ЦНС Caspr-null мышей (Rios, J. C. et al. Paranodal interactions regulate expression of sodium channel subtypes and provide a diffusion barrier for the node of Ranvier. J. Neurosci. 23, 7001-7011. 2003).
Отсутствие паранодальной перегородки (paranodal septa) у четырех паранодальных мутантов ведет к реорганизации мембраны аксона (РИС.3). У этих мутантов shaker-type К+ каналы, в норме присутствующие в juxtaparanodal области неправильно локализованы по отношению к паранодальной мембране аксона. Поэтому, возможно, что паранодальное перегородчатое соединение (paranodal septate junction) функционирует как барьер, который ограничивает передвижение К+ каналов из-под компактного миелина, отделяя их от Na+ каналов в узловых перехватах. В противоположность juxtaparanodal К+ каналам, нарушение паранодальной перегородки минимально влияет на распределение узловых Na+ каналов. Существует небольшое увеличение длины перехватов, сопровождаемое уменьшением мембранных частиц (particles) в узловой аксолемме, определяемое при FREEZE –FRACTURE электронной микроскопии. Это указывает на то, что paranodal septate junction не является необходимым для появления перехватов. Однако глиальное прикрепление в области paranodes в ЦНС необходимо для сохранения Na+ кластеризации в аксолемме.перехвата Ранвье

Juxtaparanode локализуется в короткой области сразу за paranodal junction (РИС.1b). При freeze-fracture электронной микроскопии эта область представляет собой нерегулярно расположенные частицы, которые в большей степени сконцентрированы вблизи paranodes и более диффузны по мере приближения к межперехватам (internodes). Эти частицы соответствуют скорее всего гетеромультимерам delayed rectifier K+ каналов семейства Shaker – Kv1.1, Kv1.2 и Kvβ2. В juxtaparanodal аксолемме эти каналы колокализуются и образуют комплекс с Caspr2, вторым членом Caspr семейства. Кроме того, в этом участке присутствует Kv1.6, преимущественно в небольших аксонах. Два других белка, обнаруженных в juxtaparanodes, представляют собой транзиторный аксональный glycoprotein-1 (Tag1) – GPI-связанный CAM, родственный contactin, и connexin 29 (Cx29), обнаруженый в глиальной мембране. Связь Caspr2 с К+ каналами опосредуется их карбокси-терминальной областью, вероятнее всего через неидентифицируемый PDZ DOMAIN-содержащий белок. И хотя один такой белок Psd95 локализован в juxtaparanodes и ассоциируется с К+ каналами, он, как оказалось, не участвует во взаимодействии этих каналов с Caspr2 или их накоплении в этой области. Два последних исследования показали, что Caspr2 и Tag1 формируют juxtaparanodal complex, состоящий из глиальной Tag1 молекулы и аксонального Caspr2/Tag1 гетеродимера (РИС.2с) [Poliak, S. et al. Juxtaparanodal clustering of Shaker-like K+ channels in myelinated axons depends on Caspr2 and TAG-1. J. Cell Biol. 162, 1149-1160 (2003)]. Этот комплекс необходим для аккумуляции К+ каналов в juxtaparanodes, поскольку прицельное нарушение Caspr2 или Tag1 приводит к значительному снижению juxtaparanodal аккумуляции этих каналов в аксонах как ЦНС, так и ПНС (РИС.3). Эти результаты указывают, что Caspr2 и Tag1 могут формировать скаффолды, способные позиционировать ионные каналы в специфических участках плазменной мембраны, и это напоминает механизм, работающий во время формирования синапсов.

Role of K+ channels under the myelin sheath. Предполагали, что juxtaparanodal К+ каналы работают как активные «заслонки» (damper) для возвратного возбуждения (re-entrant excitation) и способствуют сохранению межперехватного потенциала покоя (internodal resting potential). И хотя теоретически этих каналов, разбросанных в межперехватах, достаточно для поддержания потенциала покоя, для предупреждения re-entrant excitation требуется повышенная пространственная кластеризация К+ каналов около перехвата. Несмотря на значительное устранение в juxtaparanodal кластере Kv1.1/Kv1.2 у Caspr2- и Tag1-нокаутных мышей, никаких изменений в возбудимости миелинизированных нервов у них не выявлено. То, что общее количество этих каналов остается постоянным у обоих мутантов может указывать на то, что главная роль этих покрытых миелином К+ каналов заключается в поддержании межперехватного потенциала покоя. Кроме того, компьютерное моделирование, при котором учитывались вариации распределения К+ каналов и проводимости аксоглиального соединения (axoglial junctional conductance) показало, что кластеризация К+ каналов в juxtaparanode может обеспечивать защитную функцию в аксонах, которые могут подвергаться слабой демиелинизации (РИС.4). В соответствии с этой моделью Caspr2 иTag1 могут обеспечивать стабильность в аксонах, аксоглиальные соединения которых подвержены определенному риску.
Другой функцией juxtaparanodal К+ каналов может быть их посредническая роль в аксоглиальном процессе передачи информации. В ПНС эти каналы локализованы across from Cx29 гемиканалов (hemichannels), которые присутствуют в adaxonal мембране миелинизирующих Шванновских клеток и наиболее вероятно соответствуют розеточным частицам, видимым при freeze-fracture электронной микроскопии в этом участке. Такие гемиканалы могут обеспечивать прямой путь для ионов К+ из аксона в глию. Это, в свою очередь, могло бы генерировать зависимый от активности сигнал в Шванновскую клетку, что напоминает электрические синапсы сформированные gap junctions. В поддержку этой гипотезы предположили, что Ca2+ transients, записываемые в Шванновских клетках до электрической стимуляции аксона, генерировались К+ efflux (утечкой) из аксона, что деполяризует глиальную мембрану. Обмен информацией через такой «аксоглиальный синапс» в juxtaparanodes может обеспечивать дополнительный механизм для axon–gliacommunication. Интересно то, что паранодальное аксоглиальное соединение (paranodal axoglial junction) также может быть ремоделировано активностью нейронов. Этот эффект может быть отчасти опосредован контролем экспрессии contactin на поверхности аксона.

Хотя никакой специфики соединений не наблюдали между глией и аксоном в области межперехватов, при freeze-fracture электронной микроскопии было обнаружено, что межперехватная аксолемма в ПНС содержит продольные нити (longitudinal strands) внутримембранных частиц, напоминающих нити, найденные в paranodes и в juxtaparanodal областях. Как показано на РИС. 1с и 1d, Caspr и contactin локализуются по всей межперехватной области в полосе, фланкированной К+ каналами и Caspr2, которая соединяет внутренний мезаксон (inner mesaxon) миелиновой оболочки и формирует периферическое кольцо ниже внутренней стороны SCHMIDT-LANTERMAN INCISURES. Эта линия, названная juxtamesaxonal и juxta-incisural (Scherer, S. S. & Arroyo, E. J. Recent progress on the molecular organization of myelinated axons. J. Peripher. Nerv. Syst. 7, 1-12. 2002), является прямым продолжением paranodes/juxtaparanodes. Следовательно, Nf155, Cx29 и Tag1 ограничены в дополнительном распространении на adaxonal мембране миелинизирующих Шванновских клеток. Эти находки указывают, что локализация аксонных белков в межперехватах диктуется миелиновой оболочкой, вероятно, посредством механизма, сходного с тем, который работает в paranode/juxtaparanode. Однако недавний анализ Caspr2-null мышей показал, что разные механизмы могут контролировать локализацию К+ каналов в juxtaparanodes и в juxtamesaxon. Молекулярная организация межперехватной области не изучена в миелинизированных нервах ЦНС.

Formation of the nodal environ

The role of myelinating glia. Во время развития миелинизации нервов в ПНС разные узловые домены формируются постепенно. Na+ каналы сначала кластеризуются в перехватах, затем появляется паранодальное соединение и позже происходит группировка К+ каналов в области juxtaparanode. И в ЦНС, и в ПНС Na+ каналы кластеризуются сначала в участках, прилегающих к границам отростков олигодендроцитов и миелинизирующих Шванновских клеток. Дальнейший продольный рост этих отростков вызывает смещение кластеров до тех пор, пока два соседних кластера не сольются, формируя новый перехват Ранвье. Эти результаты свидетельствуют о том, что Na+ кластеры позиционируются посредством прямого глиального контакта. Следовательно, распространение Na+ каналов является диффузным в ретинальных ганглиозных клетках (retinal ganglion cells), но они правильно кластеризуются в перехватах, после того как аксоны пересекут lamina cribrosa и станут миелинизированными. Эти каналы не группируются после удаления олигодендроцитов или Шванновских клеток и рассеиваются во время демиелинизации. Более того, перехватные Na+ каналы связаны с краями миелинизирующих Шванновских клеток в нервах с более короткими межперехватами, что является результатом ремиелинизации (remyelination) или генетической мутации, как, например, у мутантных мышей CLAW PAW. Однако исследование с использованием ганглиозных клеток ретины показало, что Na+ кластеризация может быть индуцирована in vitro растворимыми факторами, секретируемыми культивируемыми олигодендроцитами. И хотя Шванновские клетки не проявляют такой кластеризирующей активности, некоторая кластеризация Na+ каналов определялась в отсутствии миелинизирующих Шванновских клеток у дистрофичных мышей. Недавний анализ dysmyelinating или paranodal мутантов, а также моделей демиелинизации показал, что присутствие интактных миелинизирующих олигодендроцитов необходимо для включения во время развития изоформы Na+ канала в перехватах. И, напротив, Nav1.6 обнаружена в перехватах у двух миелиновых мутаций, которые ассоциируются с гибелью олигодендроцитов и отсутствием нормального паранодального соединения. – у MYELIN DEFICIENT (MD) крыс и у JIMPY мутантных мышей. Эти наблюдения указывают, что «включение» может происходить в отсутствие нормального паранодального контакта или миелина. Следует отметить, что недавний анализ SHIVERER мутантов показал, что в то время как аксоглиальный контакт необходим для экспрессии Nav1.6 в перехватах, он не нужен для таргетирования этой подгруппы в начальном сегменте аксона, что свидетельствует о существовании множественных адресных механизмов при миелинизации аксонов.

Molecular assembly. Во время миелинизации нервов в ПНС, Nrcam и Nf186 первыми определяются в перехватах, после чего появляются ankyrin G и Na+ каналы. Однако в ЦНС ankyrin G определяется в перехватах до кластеризации Nf186 и Na+ каналов. Эти результаты указывают, что Nrcam, Nf186 или неидентифицируемый ankyrin G-binding белок связывают ankyrin G, который, в свою очередь, «рекрутирует» Na+ каналы. В поддержку этой модели свидетельствует тот факт, что добавление растворимого Nrcam в культуру myelinating dorsal root ganglia подавляет кластеризацию Na+ каналов. Более того, появление ankyrin G и Na+ каналов в перехватах отсрочено у Nrcam-null мышей, что свидетельствует об участии этой адгезивной молекулы в кластеризации. Формирование перехватов у этих животных можно объяснить присутствием Nf186, который содержит сходный ankyrin G-binding сайт и, следовательно, может компенсировать отсутствие Nrcam. Значимость взаимодействия между ankyrin G и такими компонентами перехвата была показана у мышей с отсутствием мозжечковой изоформы ankyrin G, у которых Na+ каналы, Ig-CAMs и spectrin βIV не группируются в начальном сегменте аксонов клеток Пуркинье. Похожую картину наблюдали у спонтанной мутации по spectrin βIV – QUIVERING мышей (или у мышей с прицельным нарушением этого гена), у которых найдены аномалии перехватов и измененное распределение каналов. Однако ankyrin G также присутствует в параузлах (paranodes) во время ранней миелинизации аксонов, что говорит не о его прямом участии в первичном таргетировании Na+ каналов, а скорее о его важности для их стабилизации. Кроме того, ankyrin G в норме локализован в перехватах у dystroglycan-null мышей, у которых показана значительная редукция кластеров перехватных Na+ каналов. После первичной кластеризации компонентов перехватов в волокнах ПНС, Nf155 и Caspr/Contactin комплекс аккумулируются в paranodal junction. После этого появляются Caspr2 и К+ каналы в juxtaparanodal области. Caspr2, К+ каналы и TAG-1 первыми определяются в параузлах (paranodes) и позже они перемещаются в juxtaparanodes как формы паранодального соединения (paranodal junction forms). В отсутствии такого соединения К+ каналы не перемещаются в juxtaparanodes и остаются рядом с перехватами (РИС.4; ТАБЛ.1 и 2). Дальнейшее поддержание К+ каналов в juxtaparanodal области требует Caspr2 и Tag1, поскольку в их отсутствии эти каналы перераспределяются по межперехватам.

Molecular sieves, pickets and fences. Сегрегация белков на отдельные домены в нейронах достигается через специфические сортировочные механизмы, за которыми следует закрепление и кластеризация этих белков в плазменной мембране. Формирование окружения перехвата Ранвье может включать несколько различных молекулярных механизмов (РИС.5). Удаление Na+ каналов с границ миелинизирующей глии во время развития может быть осуществлено с помощью селективной молекулярной фильтрации или «сита», обнаруженной в paranodes (РИС.5с). Предполагали, что такое «сито» не пропускает крупные белковые комплексы, включая Na+ каналы и Ig-CAMs, соединенные с ankyrin G, и пропускает мелкие мембранные частицы – соответствующие К+ каналам. Такой процесс требует аксоглиального контакта, но он не опосредуется Caspr/contactin комплексом, т.к. его отсутствие не препятствует кластеризации Na+ каналов в перехватах. Поэтому, появление зрелых, септ-содержащих (septa-containing) паранодальных соединений может быть необязательным для эффективной кластеризации Na+ каналов. Это мнение подтверждается данными freeze-fracture электронной микроскопии, при которой была показана ранняя дифференцировка перехватов еще до появления paranodal septa (паранодальной перегородки). Следовательно, накопление Caspr в параузлах и кластеризация Na+ каналов в перехватах происходит перед появлением septa (перегородки). Следует заметить, что постепенное открепление паранодальных петель (paranodal loops) в ЦНС у паранодальных мутантов сопровождается расширением пробела перехвата и рассеиванием Na+ каналов. Это указывает на то, что хотя septa и не является необходимым компонентом для первичной сборки Na+ каналов в перехватах, стабилизированные глиальные контакты (зависимые от septa) в paranodes могут быть необходимым компонентом для поддержания этих кластеров. Интересно, что кластеризация Na+ каналов в зрительном нерве Caspr-null мышей, у которых отсутствует paranodal septa, ассоциируется с кластерами соседних К+ каналов и это увеличивает вероятность того, что Caspr2 и Tag1 компенсируют в этих участках отсутствие Caspr и contactin.
В отличие от кластеризации Na+ каналов в перехватах, формирование septa- содержащих аксоглиальных соединений важно для изоляции К+ каналов в juxtaparanodes. Эти наблюдения указывают, что, будучи однажды сформированными, аксоглиальные septate соединения функционируют как барьер, ограничивающий движение этих каналов и других молекул из-под миелиновой оболочки к перехватам. Предполагается также, что молекулярное «сито», функционирующее в paranodes во время формирования перехватов, могло бы изменить эти свойства после того как paranodal loops уже обеспечат безопасность аксона посредством septate junction. Появление такого барьера может быть опосредовано прикреплением Caspr/contactin комплекса к цитоскелету аксона, связывающегося с глиальным лигандом, и сборкой специфических липидных микродоменов. И хотя вклад липидного состава мембраны в появление доменов аксона пока не изучен, интересно то, что contactin, Caspr и Tag1 ассоциируются с липидными плотиками (rafts).
Кроме paranodal junction возможно также существование мембранного барьера в перехватах. И хотя Caspr2/K+ канальный комплекс и Tag1 неправильно локализованы в паранодальной области в отсутствие paranodal junction, эти белки не проникают в перехваты, указывая на присутствие дополнительного барьера в этом участке. Такой барьер в области перехвата может быть сходен с диффузным барьером (или мембранным барьером), обнаруженным в начальном сегменте аксона, который можно рассматривать как первый перехват в большинстве миелинизированных аксонов. В начальном сегменте аксона этот барьер сформирован высоко концентрированными локальными трансмембранными белками, которые прикреплены к актиновому цитоскелету и которые служат в качестве «пикетов», способных блокировать диффузию мембранных белков и фосфолипидов. Интересно то, что интактный актиновый цитоскелет в аксонах ганглиев сетчатки также необходим для кластеризации Na+ каналов при воздействии растворимого фактора, секретируемого олигодендроцитами.
Рассматриваются два других молекулярных механизма, участвующих в формировании перехватов. В ПНС кластеризация перехватных Na+ каналов во время развития может быть опосредована контактирующими глиальными отростками, которые «тянут» Na+ каналы и Ig-CAMs по направлению к их окончательной позиции на аксолемме (РИС.5b). Это может быть осуществлено с помощью связывания Na+ каналов с микроворсинками Шванновских клеток, либо непосредственно через их β-субъединицы, либо косвенно через Nrcam и Nf186. Во время развития ERM-позитивные ворсинки Шванновских клеток осуществляют ранний контакт с перехватами во время их образования. Эти участки контактов (названные «caps») содержат phosphorylated adaptor EBP50 и face across axonal ankyrin G. Разрушение микроворсинок у мышей без dystroglycan в Шванновских клетках ведет к значительному снижению кластеризации Na+ каналов в узловых перехватах. Остается выяснить, связывает ли dystroglycan какие либо узелковые белки, опосредуя, таким образом, такое аксоглиальное взаимодействие.
Микроворсинки содержат также другие кандидатные белки, включая L1 и neurofascin, способные связывать Ig-CAMs, присутствующие в аксолемме. Наконец, возможно, что кластеризация Na+ каналов в перехватах Ранвье осуществляется с помощью downregulation этих каналов из нижних (from beneath) межперехватов и посредством селективной инсерции вновь синтезированных или рециклированных молекул в формирующийся узловой пробел (РИС.5d). Маловероятно, но во время развития может работать механизм «доставки». На это указывают такие наблюдения как перемещение изоформ Na+ каналов после формирования перехватов, присутствие высокой концентрации везикул в перехватах и тесная связь Na+ каналов с микротрубочками. Сходный механизм также может работать при формировании juxtaparanodes в ЦНС, где К+ каналы первыми определяются во время развития.

Источник