Чем определяется специфичность белкового антигена
Чем определяется специфичность белкового антигена?
Для структуры клеточной стенки бактерий характерны все нижеуказанные свойства, кроме
Г. Отвечает за процесс дыхания бактерий.
13. В цитоплазматической мембране происходят все процессы, кроме:
B. Движения бактерий.
14. Бактериальная клетка может сохранить жизнеспособность при отсутствии:
15. К свойствам спор бактерий относятся все, кроме:
Г. Являются формой размножения бактерий.
16. К свойствам капсул бактерий относятся все, кроме:
A. Капсулы хорошо воспринимают красители.
17. Для окрашивания по методу Грама требуется все, кроме:
18. Для окраски мазка по методу Циля-Нильсена требуется все, кроме:
19. Для окраски мазка по методу Гинса-Бурри требуется все, кроме:
A. Фуксин Пфейффера (водный).
22. Дробной стерилизацией называется:
23. Искусственные питательные среды классифицируют по всем ниже перечисленным признакам, кроме:
24. К искусственным питательным средам предъявляются все ниже перечисленные требования, кроме:
25. При бактериоскопическом исследовании материала можно определить все перечисленное, кроме:
Г. Антигенной структуры бактерий.
26. Бактериологическое исследование материала проводят с целью:
B. Определения вида бактерий.
27. К видовым (таксономическим) свойствам бактерий не относятся:
Г. Способность окрашиваться фуксином Пфейффера.
28. Бактериофаг характеризуется всеми перечисленными признаками, кроме:
A. Клеточной организацией.
29. К осложнениям антибиотикотерапии можно отнести все перечисленное, кроме:
Б. Лизогенная конверсия.
30. Продуцентами антибиотиков не являются:
31. В классификации бактерий по типу дыхания нельзя указать следующую группу:.
32. В процессе дыхания у анаэробов принимают участие:
ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ
33. Периоды развития инфекционного процесса все, кроме:
34. Как называются инфекционные болезни, источником которых являются объекты окружающей среды:
Г. Появления неспецифических симптомов инфекционной болезни.
37. Для септикопиемии характерно все, кроме:
Д. Отсутствия в крови патогенных микроорганизмов.
38. Характерное свойство эндотоксинов:
Б. Находятся в клеточной стенке грамотрицательных бактерий.
39. Для бактериальных экзотоксинов характерно все, кроме:
B. Липополисахаридная природа.
40. Адгезивная способность бактерий обусловлена:
41. К факторам патогенности бактерий относятся все, кроме:
Д. Отсутствия оформленного ядра.
42. Фактором патогенности с инвазивной функцией является:
43. Автором клонально-селекционной теории иммунитета является:
44. Кто является автором фагоцитарной теории иммунитета:
45. Активным иммунитетом является:
A. Поствакцинальный. Б. Постинфекционный B. Формирующийся при введении анатоксина.
Г. Возникающий при ревакцинации.
Д. Все перечисленное.
46. Какой вид иммунитета является пассивным:
А. После введения иммунных сывороток.
47. Центральным органом иммунитета является:
48. К иммунокомпетентным клеткам относятся все, кроме:
49. Полноценные антигены обладают:
A. Высокой молекулярной массой. Б. Иммуногенностью.B.Специфичностью.Г.Чужеродностью.
Д. Всем вышеперечисленным.
Что такое гаптен?
Д. Неполный антиген.
Какое из перечисленных химических веществ является полноценным антигеном?
Чем определяется специфичность белкового антигена?
Г. Качественным составом и последовательностью аминокислот в эпитопе.
53. Специфичность антител определяется:
В. Пространственной конфигурацией активного центра.
54. К факторам неспецифической резистентности относятся:
А. Фагоцитоз. Б. Лизоцим. В. Нормальная микрофлора. Г. Интерферон.
Д. Все вышеперечисленное.
55. Для иммуноглубулинов класса М характерно:
A. Способность связывать комплемент. Б. Появляется первым в иммунном ответе на инфекцию.
B. Состоит из пяти субъединиц. Г. Является самым тяжелым из всех классов иммуноглобулинов.
Д. Все вышеперечисленное.
56. Отличительной особенностью иммуноглобулинов класса Е является:
57. Иммуноглобулины класса А:
A. Обеспечивают местный иммунитет.
58. Наличие полного гемолиза при постановке РСК расценивается как:
B. Отрицательный результат реакции.
59. Образование в титрационной панели аморфного осадка в виде «перевернутого зонтика» можно расценивать как:
A. Положительный результат при постановке РНГА.
60. Для выявления антител в сыворотках больных людей используют:
61. «Меченые» (коньюгированные) диагностические сыворотки используют для выявления микробных антигенов в реакции:
62. Для специфической профилактики заболеваний, вызванных токсинообразующими бактериями, используют:
В. Анатоксины
63. Стафилококки окрашиваются по Граму:
64. Расположение стафилококков в мазке:
B. Группами («виноградная гроздь»).
65. Питательная среда, используемая для культивирования стафилококков:
66. Какое из нижеперечисленных свойств стафилококков дает основание считать их вирулентными:
B. Коагулазная активность.
67. Основной метод диагностики стафилококковых инфекций:
68. Обязательно ли изучение антибиотикочувствительности выделенных культур патогенных стафилококков:
69. Питательная среда для культивирования стрептококков:
70. Характер гемолиза подозрительных колоний пиогенных стрептококков:
71. Принцип классификации стрептококков:
Б. По антигенной структуре.
72. Постинфекционный иммунитет после перенесенной стрептококковой ангины:
73. Расположение в мазке менингококков:
74. Что считают главным фактором вирулентности менингококка:
Г. Способность к выживанию внутри клетки.
75. Питательные среды для культивирования менингококков:
B. Сывороточный агар.
76. Вакцина, используемая для профилактики менингококковых инфекций:
77. Окраска менингококков по Граму:
78. Какой из сахаров ферментируют гонококки:
79. Постинфекционный иммунитет при гонорее:
80. Гоновакцина применяется для:
81. Морфология бруцелл:
Б. Короткие грамотрицательные палочки.
82. Какие животные являются природным резервуаром В. abortus:
B. Крупный рогатый скот.
83. Основной метод, используемый для диагностики бруцеллеза:
84. Для профилактики бруцеллеза используют:
85. Морфология В. anthracis:
86. Продукция сибиреязвенного экзотоксина:
87. В реакции Асколи исследуют:
В. Материал от погибших животных
88. Особенность сибиреязвенной вакцины:
A. Бескапсульные авирулентные микроорганизмы.
89. При микроскопическом исследовании материала обращают внимание на следующие особенности возбудителя чумы:
Б. Овоидная форма с биполярным окрашиванием.
90. Характер колоний Y. pestis:
B. Колонии R-формы («смятый кружевной платочек»).
91. Степень выраженности постинфекционного противочумного иммунитета:
B. Напряженный стойкий иммунитет.
92. К какой группе биологически опасных агентов относится возбудитель чумы:
93. Основным резервуаром возбудителя в природе являются:
94. Для получения первых генераций возбудителя туляремии используют:
Б. Чувствительных лабораторных животных.
95. Аллергическая проба с тулярином выявляет:
96. Для профилактики туляремии используют:
97. Энтеробактерии окрашиваются по Граму:
98. У энтеробактерии тип дыхания:
99. Для всех энтеробактерий характерна утилизация:
100. О-антиген энтеробактерии представляет собой:
Г. Липополисахаридопротеиновый комплекс.
101. Иммуногенность энтеробактерий обусловливает:
Б. Полисахаридная часть.
102. У новорожденных наиболее частым возбудителем ОКИ являются:
B. Энтеропатогенные эшерихии.
103. Для первичного выделения эшерихий не применяют:
104. Дифференциация внутри вида E.coli основана главным образом на изучении:
Г. Антигенной структуры.
105. Ha пластинчатых средах 2 типа (S и R) колоний образуют:
106. Самый активный по биохимическим свойствам вид шигелл:
107. Для рода шигелл общим и стабильным является:
A. Отсутствие подвижности
108. Методом ранней диагностики брюшного тифа является:
A. Выделение гемокультуры.
109. Кровь от больного с подозрением на брюшной тиф следует сеять:
Б. На среду Раппопорт.
110. Классификация сальмонелл основана на различиях в:
A. Антигенной структуре.
111. Серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифов был разработан:
112. Наиболее часто в настоящее время выделяются от больных сальмонеллы вида:
113. При брюшном тифе для серологической диагностики предпочтительной является:
114. В качестве среды обогащения при сальмонеллезе используют все, кроме:
115. При диагностике кишечного сальмонеллеза материалом исследования служит все, кроме:
116. К антропонозным заболеваниям не относится:
117. Разложение углеводов до кислоты без газа характерно для сальмонелл:
118. Главными тестами в идентификации выделенных культур рода шигелла являются:
A. Биохимическая активность.
Б. Тест антигенной структуры.
B. Лизабельность специфическим бактериофагом.
Г. Все перечисленное.
119. Основным признаком дифференциации биоваров возбудителей холеры является:
Г. Чувствительность к специфическим бактериофагам.
120. Главный фактор патогенности возбудителя холеры:
121. Основным признаком, идентифицирующим вид возбудителя холеры, является:
В. Антигенная структура.
122. Возбудителями холеры не является:
A. V. parahaemoliticus.
123. Дисбактериозом кишечника называют:
Б. Количественные и качественные изменения собственной микрофлоры кишечника.
124. Основные функции нормальной микрофлоры макроорганизма:
Е. Все перечисленное.
125. В кишечнике практически здоровых людей должны преобладать:
126. Обнаружение бифидобактерий производится на:
127. При дисбиозе в составе эшерихий возможны следующие изменения:
A. Увеличение общего количества эшерихий.
Б. Замена полноценных в ферментативном отношении эшерихий на эшерихии со сниженной ферментативной активностью.
B. Возрастание количества эшерихий с гемолитической активностью.
Г. Снижение общего количества эшерихий.
Д. Все перечисленное.
128. При обследовании на дисбиоз первичный посев производится на:
В. Селективные среды количественным методом.
129. Для пищевых отравлений характерно:
A. Острое внезапное начало.
Б. Одновременность заболевания у группы лиц.
B. Связь заболевания с употреблением какого-то одного продукта или блюда.
Г. Острое короткое течение заболевания.
Д. Все перечисленное.
130. Для человека патогенны:
131. Для С1. botulinum характерно все, кроме:
А. Принадлежности к Грам (-) флоре.
132. Для стафилококкового пищевого токсикоза характерно:
A. Накопление в пищевом продукте стафилококкового энтеротоксина.
Б. Накопление в пищевом продукте эндотоксина.
133. Возбудителями пищевых токсикозов являются все, кроме:
134. Отравления «продуктами моря» чаще всего связаны с:
Г. V. parahaemoliticus.
135. По патогенетическому принципу микробные пищевые отравления делятся на:
A. Токсикоинфекции и токсикозы.
136. Вид Cl. botulinum подразделяется на варианты по следующим свойствам:
B. Специфика экзотоксина.
137. Методы окраски, используемые для изучения включений возбудителя дифтерии:
138. При идентификации возбудителя дифтерии изучают:
139. Какая особенность токсигенных штаммов Corynebacterium diptheriae:
Б. Лизогенные бактерии.
140. Какой основной признак лизогенных бактерий:
B. Содержат геномы фагов в генофоре бактерий.
141. Токсигенность возбудителя дифтерии изучают:
A. В реакции диффузионной преципитации в геле.
142. Типы gravis и mitis можно дифференцировать по следующим свойствам:
A. Культуральным и биохимическим.
143. Противодифтерийная антитоксическая сыворотка используется в основном:
B. Для лечения больных дифтерией.
144. АКДС-вакцина включает:
A. Дифтерийный анатоксин.
145. При подозрении на коклюш для бактериологического исследования берут:
A. Материал из зева.
146. Отличить возбудитель коклюша от паракоклюша можно по:
A. Морфологическим и тинкториальным свойствам.
Б. Антигенной структуре.
147. Диагноз коклюша позволяет поставить:
B. Бактериологический метод.
148. Возбудитель паракоклюша растет на:
Б. Мясо-пептонном агаре.
149. Методы окраски, используемые для определения возбудителя туберкулеза:
150. С чем связана кислотоустойчивость возбудителя туберкулеза:
B. С высоким содержанием липидов в клеточной стенке.
151. Какая проба позволяет выявить сенсибилизацию макроорганизма при туберкулезе:
152. Вид вакцины, применяемой для профилактики туберкулеза:
153. Для диагностики первичного сифилиса применяется:
Б. Микроскопия исследуемого материала.
154. Особенности микроскопии бледной трепонемы:
Б. Темнопольная микроскопия нативного препарата.
155. Какие тесты наиболее специфичны для диагностики сифилиса:
Чем определяется специфичность белкового антигена
бОФЙЗЕОЩ РТЕДУФБЧМСАФ УПВПК ЮХЦЕТПДОЩЕ ЧЕЭЕУФЧБ ЙМЙ УФТХЛФХТЩ, ЛПФПТЩЕ УРПУПВОЩ ЧЩЪЩЧБФШ ЙННХООЩК ПФЧЕФ. фЕПТЕФЙЮЕУЛЙ МАВБС НПМЕЛХМБ НПЦЕФ ВЩФШ БОФЙЗЕООПК, РПРБЧ Ч ПТЗБОЙЪН, ЛПФПТЩК ЧПУРТЙОЙНБЕФ ЕЕ ЛБЛ ЮХЦЕТПДОХА Й ДБЕФ ОБ ОЕЕ ЙННХООЩК ПФЧЕФ. ч ЬФПН ПРТЕДЕМЕОЙЙ УЛТЩФЩ ДЧЕ ПУОПЧОЩЕ ИБТБЛФЕТЙУФЙЛЙ БОФЙЗЕОБ: ЙННХОПЗЕООПУФШ Й БОФЙЗЕООБС УРЕГЙЖЙЮОПУФШ.
уРЕГЙЖЙЮОПУФШ ЧЪБЙНПДЕКУФЧЙС БОФЙЗЕОБ У БОФЙФЕМПН ЪБЧЙУЙФ ПФ РТПУФТБОУФЧЕООПК ЛПОЖЙЗХТБГЙЙ ДЕФЕТНЙОБОФ. тБЪМЙЮБАФ:
ЛПОЖПТНБГЙПООХА, РТЕДУФБЧМЕООХА ПРТЕДЕМЕООЩНЙ ПВМБУФСНЙ ВЕМЛПЧ, ТБУРПМПЦЕООЩНЙ ОБ РПЧЕТИОПУФЙ НПМЕЛХМ.
лмбууйжйлбгйс бофйзеопч
рТЙ ЛМБУУЙЖЙЛБГЙЙ БОФЙЗЕОПЧ ХЮЙФЩЧБАФ ОЕ ФПМШЛП ИЙНЙЮЕУЛЙК УПУФБЧ, РТПЙУИПЦДЕОЙЕ, ОП Й ЗЕОЕФЙЮЕУЛЙЕ ЧЪБЙНППФОПЫЕОЙС НЕЦДХ БОФЙЗЕОБНЙ ДПОПТБ Й ТЕГЙРЙЕОФБ, ХУФБОБЧМЙЧБЕНЩЕ ФТБОУРМБОФБГЙПООПК ЙННХОПМПЗЙЕК.
тБЪМЙЮОЩЕ ЛМЕФЛЙ Й ЛТХРОЩЕ ЮБУФЙГЩ: ВБЛФЕТЙЙ, ЗТЙВЛЙ, РТПУФЕКЫЙЕ, ЬТЙФТПГЙФЩ
вЕМЛЙ ТБЪМЙЮОПК УФЕРЕОЙ УМПЦОПУФЙ, РПМЙУБИБТЙДЩ
бОФЙЗЕОЩ ЛМЕФПЮОПК РПЧЕТИОПУФЙ, ЛПОФТПМЙТХЕНЩЕ злзу
бОФЙЗЕОЩ ФЛБОЕК Й ЛМЕФПЛ, ПФМЙЮБАЭЙЕУС ПФ ТЕГЙРЙЕОФБ ОБ ЧЙДПЧПН ХТПЧОЕ (ДПОПТ Й ТЕГЙРЙЕОФ ТБЪОЩИ ЧЙДПЧ)
бОФЙЗЕОЩ ФЛБОЕК Й ЛМЕФПЛ, ПФМЙЮБАЭЙЕУС ПФ ТЕГЙРЙЕОФБ ОБ ЧОХФТЙЧЙДПЧПН ХТПЧОЕ (ДПОПТ Й ТЕГЙРЙЕОФ РТЙОБДМЕЦБФ Л ЗЕОЕФЙЮЕУЛЙ ОЕЙДЕОФЙЮОЩН ЙОДЙЧЙДБН ПДОПЗП Й ФПЗП ЦЕ ЧЙДБ)
дПОПТ Й ТЕГЙРЙЕОФ РТЙОБДМЕЦБФ Л ПДОПК Й ФПК ЦЕ ЙОВТЕДОПК МЙОЙЙ ЦЙЧПФОЩИ
зЕОЕФЙЮЕУЛБС ЙДЕОФЙЮОПУФШ ЙОДЙЧЙДПЧ (О-Т, ПДОПСКГЕЧЩЕ ВМЙЪОЕГЩ)
бОФЙЗЕОЩ УПВУФЧЕООЩИ ЛМЕФПЛ ПТЗБОЙЪНБ
бОФЙЗЕОЩ РЙЭЙ, РЩМЙ, РЩМШГЩ ТБУФЕОЙК, СДПЧ ОБУЕЛПНЩИ, ЧЩЪЩЧБАЭЙЕ РПЧЩЫЕООХА ТЕБЛФЙЧОПУФШ
бОФЙЗЕОЩ ЛМЕФПЛ, ВЕМЛПЧ, ЧЩЪЩЧБАЭЙЕ БТЕБЛФЙЧОПУФШ
йУЛХУУФЧЕООП УЙОФЕЪЙТПЧБООЩЕ РПМЙНЕТЩ БНЙОПЛЙУМПФ, ХЗМЕЧПДПЧ
рТПУФЩЕ ИЙНЙЮЕУЛЙЕ УПЕДЙОЕОЙС Ч ПУОПЧОПН БТПНБФЙЮЕУЛПЗП ТСДБ
рПМОПГЕООПЕ ТБЪЧЙФЙЕ УРЕГЙЖЙЮЕУЛПЗП ЙННХООПЗП ПФЧЕФБ ЬФЙИ БОФЙЗЕОПЧ ОБЮЙОБЕФУС ФПМШЛП РПУМЕ РПДЛМАЮЕОЙС ф-ЛМЕФПЛ
рПМЙУБИБТЙДЩ, У РПЧФПТСАЭЙНЙУС УФТХЛФХТОП ЙДЕОФЙЮОЩНЙ ЬРЙФПРБНЙ, УФЙНХМЙТХАФ ч- ЛМЕФЛЙ; УРПУПВОЩ ЙОЙГЙЙТПЧБФШ ЙННХООЩК ПФЧЕФ Ч ПФУХФУФЧЙЙ ф- ИЕМРЕТПЧ
ъБДБОЙЕ 2. ъБТЙУХКФЕ УИЕНХ ХУМПЧОПЗП ПВТБЪБ БОФЙЗЕОБ. лБЛЙЕ УФТХЛФХТЩ ПВПЪОБЮЕОЩ ОБ ТЙУХОЛЕ 1 ГЙЖТБНЙ ПФ 1 ДП 6?
тЙУ. 1. хУМПЧОЩК ПВТБЪ БОФЙЗЕОБ.
бОФЙФЕМБ РТЕДУФБЧМСАФ УПВПК ЗМПВХМЙОЩ, УРЕГЙЖЙЮЕУЛЙ ТЕБЗЙТХАЭЙЕ У БОФЙЗЕОПН, ЛПФПТЩК ПРТЕДЕМЙМ ЙИ ПВТБЪПЧБОЙЕ. у 1964 З. БОФЙФЕМБ РТЙОСФП ОБЪЩЧБФШ ЙННХОПЗМПВХМЙОБНЙ.
тЙУ. 2. уИЕНБ УФТПЕОЙС НПМЕЛХМЩ ЙННХОПЗМПВХМЙОБ.
ъБДБОЙЕ 3. тБУУНПФТЙФЕ ТЙУХОПЛ 2. пВПЪОБЮШФЕ ПУОПЧОЩЕ УФТХЛФХТЩ ЙННХОПЗМПВХМЙОБ.
ъБДБОЙЕ 4. у РПНПЭША ОЙЦЕРТЙЧЕДЕООЩИ УИЕН ЙННХОПМПЗЙЮЕУЛЙИ ТЕБЛГЙК ПРТЕДЕМЙФЕ ПУПВЕООПУФЙ ТБЪОЩИ ФЙРПЧ ЙННХООПЗП ПФЧЕФБ.
гЕМША МАВПК ЙННХОПМПЗЙЮЕУЛПК ТЕБЛГЙЙ СЧМСЕФУС ХОЙЮФПЦЕОЙЕ БОФЙЗЕОБ Й ЪБЭЙФБ ПТЗБОЙЪНБ. чУФТЕЮБСУШ У БОФЙЗЕОПН ЛМЕФЛЙ ЙННХООПК УЙУФЕНЩ ДПМЦОЩ:
2. дБФШ ЙННХОПМПЗЙЮЕУЛЙК ПФЧЕФ.
пуопчобс уиенб йннхоопзп пфчефб
2. еУМЙ ЧФПТЦЕОЙЕ ЧУЕ ЦЕ РТПЙЪПЫМП, БОФЙЗЕО ЧУФТЕЮБЕФУС У ЖБЗПГЙФЙТХАЭЙНЙ ЛМЕФЛБНЙ.
3. нБЛТПЖБЗ (ЖБЗПГЙФ) РПЦЙТБЕФ Й РЕТЕЧБТЙЧБЕФ БОФЙЗЕО.
4. еУМЙ ПО ОЕ УРТБЧМСЕФУС У ОЙН УБНПУФПСФЕМШОП, ФП РТЕДУФБЧМСЕФ ОБ РПЧЕТИОПУФЙ УЧПЕК НЕНВТБОЩ ЙОЖПТНБГЙА П РТПОЙЛЫЕН ЧТБЗЕ. ьФП УЙЗОБМ ф- ЙМЙ ч- МЙНЖПГЙФПЧ.
5. ч ПФЧЕФ ОБ РПМХЮЕООЩК УЙЗОБМ П ЧФПТЦЕОЙЙ Ч РЕТЙЖЕТЙЮЕУЛЙИ ПТЗБОБИ ЙННХООПК УЙУФЕНЩ ОБЮЙОБЕФУС ПФВПТ ЛМЕФПЛ, ОЕПВИПДЙНЩИ ДМС ВПТШВЩ ЙНЕООП У ЬФЙН БОФЙЗЕОПН. пВТБЪХЕФУС ЛМПО УППФЧЕФУФЧХАЭЙИ ЛМЕФПЛ. пДОПЧТЕНЕООП ЖПТНЙТХЕФУС ОЕВПМШЫПЕ ЛПМЙЮЕУФЧП ЛМЕФПЛ РБНСФЙ.
йннхопмпзйюеулйк пфчеф рп лмефпюопнх фйрх
2. нБЛТПЖБЗ РПЗМПЭБЕФ БОФЙЗЕО Й РТЕДУФБЧМСЕФ ЕЗП ОБ НЕНВТБОЕ.
3. йОЖПТНБГЙС П РТПФЙЧОЙЛЕ РЕТЕДБЕФУС ф-ИЕМРЕТХ.
4. ф-ИЕМРЕТ УРПУПВУФЧХЕФ ЖПТНЙТПЧБОЙА ЛМПОБ ф-ЛЙММЕТПЧ. пВТБЪХАФУС ЛМЕФЛЙ РБНСФЙ.
5. ф- ЛЙММЕТЩ УРПУПВОЩ ТБЪТХЫБФШ ЧФПТЗЫЙЕУС ЛМЕФЛЙ Й ЛМЕФЛЙ, ЪБТБЦЕООЩЕ ЧЙТХУПН.
6. тЕБЛГЙС ЪБЧЕТЫБЕФУС РТЙ ХЮБУФЙЙ ф- РПДБЧМСАЭЙИ ЛМЕФПЛ.
йннхопмпзйюеулйк пфчеф рп зхнптбмшопнх фйрх у рпнпэша ф- иемретпч
1. рТПОЙЛОПЧЕОЙЕ БОФЙЗЕОБ.
2. рПЗМПЭЕОЙЕ БОФЙЗЕОБ Й РПСЧМЕОЙЕ ЙОЖПТНБГЙЙ П ОЕН ОБ НБЛТПЖБЗЕ.
3. рЕТЕДБЮБ ЙОЖПТНБГЙЙ ф- ИЕМРЕТХ.
6. рМБЪНБФЙЮЕУЛБС ЛМЕФЛБ ЧЩТБВБФЩЧБЕФ ЙНЕООП ФЕ БОФЙФЕМБ, ЛПФПТЩЕ ОХЦОЩ ДМС ВПТШВЩ У РПУФХРЙЧЫЙН БОФЙЗЕОПН. пОЙ УЧСЪЩЧБАФ ЕЗП, ПВТБЪХС ЙННХООЩК ЛПНРМЕЛУ.
8. ъБЧЕТЫЕОЙЕ ЙННХОПМПЗЙЮЕУЛПК ТЕБЛГЙЙ РТПЙУИПДЙФ РТЙ ХЮБУФЙЙ ф- РПДБЧМСАЭЙИ ЛМЕФПЛ.
йннхопмпзйюеулйк пфчеф рп зхнптбмшопнх фйрх веъ рпнпэй ф- лмефпл
1. рТПОЙЛОПЧЕОЙЕ БОФЙЗЕОБ.
2. рПЗМПЭЕОЙЕ БОФЙЗЕОБ Й РТЕДУФБЧМЕОЙЕ ЕЗП ОБ НБЛТПЖБЗЕ.
5. бОФЙФЕМБ УЧСЪЩЧБАФ БОФЙЗЕОЩ.
гЙФПЛЙОЩ Ч ПУОПЧОПН ЙЗТБАФ ТЕЗХМЙТХАЭХА ТПМШ Ч НЕЦЛМЕФПЮОЩИ ЧЪБЙНПДЕКУФЧЙСИ, БЛФЙЧЙТХС ЙМЙ, ЙОЗЙВЙТХС БЛФЙЧОПУФШ ПРТЕДЕМЕООЩИ ЛМЕФПЛ. оЕЛПФПТЩН ГЙФПЛЙОБН УЧПКУФЧЕООБ РТСНБС ЬЖЖЕЛФПТОБС ЖХОЛГЙС.
гЙФПЛЙОЩ УЕЛТЕФЙТХАФУС ТБЪОЩНЙ ФЙРБНЙ ЛМЕФПЛ, Ч ПУОПЧОПН ТБЪОЩНЙ РПРХМСГЙСНЙ МЕКЛПГЙФПЧ, Й ДЕКУФЧХАФ МПЛБМШОП ПФ ЛМЕФЛЙ Л ЛМЕФЛЙ, УПЕДЙОССУШ УП УРЕГЙЖЙЮЕУЛЙНЙ ЧЩУПЛПБЖЖЙООЩНЙ ТЕГЕРФПТБНЙ.
фЕТНЙОПН ПВЯЕДЙОСАФ ТБЪОППВТБЪОЩЕ ЖБЛФПТЩ ТПУФБ, ЙОФЕТЖЕТПОЩ, ИЕНПЛЙОЩ Й ЙОФЕТМЕКЛЙОЩ. ч ОБУФПСЭЕЕ ЧТЕНС ЙДЕОФЙЖЙГЙТПЧБОП ПЛПМП 80 ГЙФПЛЙОПЧ. пДОБЛП РТЕДРПМБЗБАФ, ЮФП ЙИ ЛПМЙЮЕУФЧП РТЙВМЙЦБЕФУС Л 1000.
чпртпущ уенйобтб
1. юФП ФБЛПЕ БОФЙЗЕО? лБЛЙНЙ УЧПКУФЧБНЙ ПВМБДБЕФ БОФЙЗЕО?
2. лМБУУЙЖЙЛБГЙС БОФЙЗЕОПЧ?
4. юФП РТЕДУФБЧМСАФ УПВПК БОФЙФЕМБ?
5. иБТБЛФЕТЙУФЙЛБ РСФЙ ЛМБУУПЧ ЙННХОПЗМПВХМЙОПЧ?
Научная электронная библиотека
Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,
3.2.3. Иммуноферментный метод (ИФА)
Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) – лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала.
Твердофазный ИФА был предложен в 1971 году. Основные принципы твердофазного ИФА, независимо от модификации, заключаются в следующем:
1. На 1 этапе реакции адсорбируют антигены или антитела на твердой фазе. При этом не связавшиеся с твердой фазой реагенты легко удаляются отмыванием.
2. В сенсибилизированных лунках инкубируют исследуемый образец. В лунках с положительным контролем – стандартные реагенты. При этом на поверхности твердой фазы формируются иммунные комплексы. Несвязавшиеся компоненты удаляют отмыванием.
3. При добавлении конъюгата антитело-фермент или антиген-фермент и связывании его с иммобилизованным иммунным комплексом активный центр фермента остается доступным для последующего взаимодействия с субстратом. Инкубация субстрата в лунках с иммобилизованным конъюгатом приводит к развитию цветной реакции. Эту реакцию можно остановить на нужной стадии, выраженность окрашивания можно оценить визуально или по оптической плотности.
Из-за разнообразия объектов исследования – от низкомолекулярных соединений до вирусов и бактерий, и многообразия условий проведения ИФА существует большое количество вариантов этого метода.
Одним из принципов классификации методов ИФА является их разделение по типу проводимых на каждой из иммунохимических стадий реакций. В соответствии с эти все методы можно разделить на две группы –
гомогенные и гетерогенные. Если в ходе выполнения анализа все реакции, включая ферментативную стадию, протекают в растворе, то метод является гомогенным. Гетерогенный ИФА объединяет методы, в которых анализ проводится в двухфазной системе, при этом разделение на фазы может происходить на любой стадии определения [16].
В настоящее время EMIT (гомогенный ИФА) широко распространен во всем мире наряду с твердофазным ИФА (тИФА). EMIT по сравнению с тИФА является более экспрессным (до 2-х минут) и менее трудоемким, хотя менее чувствительный, и поэтому используется только в качественном анализе.
Возможна также классификация по типу иммунохимического взаимодействия на первой стадии анализа (в которой происходит связывание определяемого вещества). Если в системе присутствуют только анализируемое соединение и соответствующие ему центры связывания (антиген и специфические антитела), то метод является неконкурентным. Если же на первой стадии в системе одновременно присутствует анализируемое соединение и его аналог (меченное ферментом анализируемое соединение или анализируемое соединение, иммобилизованное на твердой фазе), конкурирующие за ограниченное количество центров специфического связывания, то метод является конкурентным.
Рис. 10. Конкурентный (а) и неконкурентный (б) ИФА
Примером неконкурентного формата ИФА является «сэндвич»-метод. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор, содержащий анализируемый антиген. В процессе инкубации на первой стадии на твердой фазе образуется комплекс антиген-антитело. Затем носитель отмывают от несвязавшихся компонентов и добавляют меченные ферментом специфические антитела. После вторичной инкубации и удаления избытка конъюгата антител с ферментом определяют ферментативную активность носителя, которая пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена. На стадии выявления специфического иммунокомплекса антиген оказывается как бы зажатым между молекулами иммобилизованных и меченных антител, что послужило поводом для широкого распространения названия «сэндвич»-метод.
Ферментативная реакция (цветная реакция) проходит в присутствии перекиси водорода и субстрата, представленного неокрашенным соединением, которое в процессе пероксидазной реакции окисляется до окрашенного продукта реакции на заключительном этапе проведения исследования. Интенсивность окрашивания зависит от количества выявленных специфических антител. Результат оценивается спектрофотометрически или визуально.
«Сэндвич»-метод может быть использован для анализа только тех антигенов, на поверхности которых существуют, по крайней мере, две антигенные детерминанты. На этом формате основано большое количество тест-систем для иммуноферментной диагностики различных инфекций: ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная, герпесная, токсоплазменная и другие инфекции.
Другим типом классификации схем ИФА является разделение по типу определения концентрации анализуемого вещества:
1) прямое определение образовавшихся иммунокомплексов (аналитический сигнал прямо пропорционален концентрации определяемого вещества) – прямой ИФА;
2) определение концентрации оставшихся свободными, т.е. не вступившими в реакцию компексообразования антител – непрямой ИФА.
Так, среди конкурентных схем твердофазного ИФА существует два основных формата:
Прямой конкурентный формат ИФА использует в качестве меченного ферментом реагента одного из участников иммунохимической реакции (рис. 3) – определяемое соединение или специфический к нему диагностический реагент (антитела). В результате схема ИФА состоит из 3-х стадий:
– сорбции (иммобилизации) специфических антител, либо конъюгата антигена,
– аналитической стадии: конкурентной реакция Аг-Ат с участием меченого ферментом реагента (антигена или антител),
– фермент-субстратной реакции, в результате которой образуется окрашенный (или люминисцентный) продукт.
Например, на полистирольный планшет иммобилизуют специфические антитела (рис. 11 в) иммобилизованые на твердой фазе специфические антитела. На второй стадии к иммобилизованным антителам добавляют раствор, содержащий определяемое вещество и фиксированную концентрацию меченого антигена, инкубируют и после отмывки носителя от несвязавшихся компонентов регистрируют ферментативную активность образовавшихся на твердой фазе специфических иммунных комплексов. В этой схеме меченый ферментом и немеченый антиген конкурируют за связывание с иммобилизованными специфическими антителами.
Рис. 11. Виды конкурентного ИФА:
а – непрямой конкурентный ИФА с иммобилизацией конъюгата антигена с высокомолекулярным веществом и использованием меченых антивидовых антител; б – непрямой конкурентный ИФА с иммобилизацией конъюгата антигена с высокомолекулярным веществом и использованием меченых специфических антител; в – прямой конкурентный ИФА с иммобилизацией специфических антител и использованием меченого антигена (аналита)
Преимуществом прямой схемы является небольшое число стадий, что позволяет легко автоматизировать анализ. К недостаткам схемы относятся сложность методов синтеза ферментных конъюгатов, а также возможное влияние компонентов образца на активность фермента.
В непрямом конкурентном формате ИФА используются меченные ферментом антитела (специфические или вторичные) и иммобилизованный на твердой фазе конъюгат антиген-белок-носитель
(рис. 11 а, б). Непрямая схема с использованием меченых антивидовых антител является одной из наиболее распространенных схем ИФА (рис. 11 а). На поверхности носителя иммобилизуют конъюгат антиген-белок, к которому добавляют раствор, содержащий определяемый антиген и фиксированную концентрацию немеченых специфических антител, инкубируют и после удаления несвязавшихся компонентов добавляют фиксированную концентрацию меченых антивидовых антител. После инкубации и отмывки носителя детектируют ферментативную активность образовавшихся на твердой фазе специфических иммунных комплексов. Величина аналитического сигнала в этом случае находится в обратно-пропорциональной зависимости от концентрации определяемого антигена.
Применение универсального реагента – меченых антивидовых антител – даёт возможность выявлять антитела к разным антигенам. Кроме того, анализируемый образец и меченый реагент вводятся в систему на разных стадиях, что устраняет влияние различных эффекторов, содержащихся в образце, на каталитические свойства ферментной метки. Однако такая схема анализа усложняет его проведение из-за введения дополнительных стадий.
ИФА наркотических веществ и их метаболитов в биологических жидкостях и тканях широко используется в ХТЛ, бюро судмедэкспертизы, клинико-диагностических лабораториях, медицинских центрах. Чаще всего применяется полуколичественный вариант методики, т.к. в большинстве случаев необходимо дать заключение о том, превышает ли уровень метаболитов ПАВ в образце определенную пороговую концентрацию. Однако метод ИФА может использоваться (и используется в некоторых случаях) для количественного определения метаболитов ПАВ с высокой чувствительностью – до 10–9 г/л.
Отдельно следует выделить иммунохимический метод выявления фактов употребления наркотиков в отдаленные промежутки времени (до 4 месяцев после последнего употребления ПАВ), основанный на определении антител к наркотическим веществам в крови человека [4, 5]. Данный метод использует прямую неконкурентную схему ИФА.
Компоненты, используемые в ИФА
Ферментные метки обладают чрезвычайно мощным каталитическим действием, одна молекула фермента может реагировать с большим количеством молекул субстрата. Таким образом, фермент, присутствующий в ничтожных количествах, можно выявить и количественно определить по образованию продуктов катализируемой им реакции. Другое преимущество применения ферментов в качестве меток обусловлено наличием в молекуле многочисленных функциональных групп (сульфгидрильных, карбоксильных, остатков тирозина и др.), через которые можно ковалентно присоединить молекулы лиганда.
В ИФА может использоваться не менее 15 различных ферментов. Наибольшее применение, в соответствии с вышеназванными требованиями, нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфотаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза. Все три стабильны и катализируют высокочувствительные реакции. Кроме того, продукты, получаемые в результате реакций, катализируемых этими ферментами, в зависимости от используемого субстрата, могут выявляться не только колориметрическими методами, но также флуоресцентными методами. Другие ферменты используются значительно реже. Это объясняется их более низкой в сравнении с ПХ и ЩФ удельной активностью.
Выбор субстрата в первую очередь определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция фермент-субстрат высоко специфична.
Чаще используют хромогенные субстраты, которые, разрушаясь, образуют окрашенное вещество. Перспективным является использование высокоэнергетических субстратов – флуоресцентных, хемилюминесцентных.
3. Антигены и антитела.
Аг и Aт, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. Кроме того, Аг должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант и гомогенностью. Многие синтетические и рекомбинантные Аг вирусов и бактерий хорошо себя зарекомендовали при использовании в ИФА. Это существенно повысило специфичность и воспроизводимость метода за счет сведения к минимуму перекрестных реакций.
Одним из наиболее важных реагентов в ИФА являются антитела. Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые антитела могут быть поли- или моноклинальными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgGl, IgG2), антиаллотипическими или антиидиотипическими. При низкой аффинности Ат распад комплекса Аг-Ат приводит к удалению связанного Аг из системы. Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации Аг (Aт) в испытуемых образцах.
4. Получение конъюгата.
Конъюгат – это антиген или антитело, «сшитые» с ферментной меткой или белком-носителем. Получение коньюгата – один из важных этапов разработки ИФА.
При синтезе конъюгата с ферментом подбирают такой оптимальный метод введения ферментной метки, чтобы оба компонента конъюгата сохраняли свою биологическую активность: фермент – способность взаимодействовать с субстратом, а антиген или антитело – антигенность и антигенсвязывающую активность, соответственно. Наличие меченого, высокоочищенного антигена позволяет использовать конкурентные методы ИФА. Однако антигены разнообразны по своим физико-химическим свойствам и строению, а значит невозможно разработать универсальные методики для получения конъюгата с антигеном. В этом случае получение конъюгата антигена с ферментом представляет собой отдельную сложную задачу. Приготовление меченых антител для ИФА методически более доступно.
Конъюгирование фермента с иммунохимически активными белками производится различными методами: химическая сшивка, ковалентное связывание молекулы фермента с Аг или Aт и образование соединений через нековалентные связи, например, когда связь между ферментом и Аг или Aт осуществляется иммунологически, через взаимодействие антиген-антитело.
В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие вещества. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.
Иммобилизация антигена или антител на твердой фазе возможна тремя путями:
– пассивная адсорбция, основанная на сильных гидрофобных взаимодействиях между белками и синтетической поверхностью;
– ковалентное прикрепление к твердой фазе;
– иммунохимическое и др. (нековалентное и неадсорбционное присоединение).
Пассивная адсорбция белков широко используется при проведении ИФА на платах для титрования, на нитроцеллюлозных мембранах. Пассивная адсорбция идет по принципу насыщения и коррелирует с молекулярной массой адсорбируемого вещества. В стандартных наборах ИФА используются 96-тилуночные прозрачные полистирольные планшеты.
Рис. 12. Набор для ИФА-определения наркотических еществ в биологических жидкостях: – планшет с нанесенным антигеном; 2 – положительный и отрицательный контрольный образец; 3 – реагент для выявления образовавшихся иммунных комплексов; 4 – растворы буфера для приготовления анализируемых образцов; 5 – раствор буфера для проведения фермент-субстратного окрашивания; – раствор для остановки реакции окрашивания субстрата; – инструкция по применению
Свободные сайты на поверхности твердой фазы, не связавшиеся с сорбируемым агентом, могут фиксировать в ходе теста другие молекулы, в том числе и конъюгаты, что приводит к повышению фонового сигнала. Для предотвращения неспецифического связывания после иммобилизации на твердую фазу основного материала проводят обработку нейтральными для теста веществами. Наиболее популярные блокирующие агенты – бычий сывороточный альбумин (БСА), казеин и др. Выбор блокирующего агента и условия проведения этого этапа зависят от типа твердой фазы, чувствительности системы.
Готовый набор для ИФА-определения наркотических веществ в биологических жидкостях выглядит следующим образом (рис. 12).