Что такое tcid50 мл

Терминология вакцинации

На этой схеме мы собрали определения терминов, которые могут быть непонятны при изучении вопросов о вакцинации собак.

Иммунитет (от лат. immunitas, освобождение, избавление от чего-либо) — невосприимчивость организма к инфекционным агентам и чужеродным веществам антигенной природы, несущим чужеродную генетическую информацию.

Напряжённость иммунитета — уровень специфической невосприимчивости организма в отношении определенного возбудителя инфекции, оцениваемый по иммунологическим реакциям, например по содержанию в крови специфических антител.

Активный иммунитет — иммунитет, который выработался у организма в результате вакцинации или перенесения какого-либо заболевания.

Пассивный иммунитет — иммунитет, обеспеченный наличием антител в организме, переданных от матери или в результате введения иммунной сыворотки.

Вакцинация и иммунизация

Иммунизация (лат. immunis, свободный) — это процесс, благодаря которому организм приобретает иммунитет или становится невосприимчивым к инфекционной болезни. Различают активную иммунизацию, основанную на введении прививаемым вакцины (вакцинация, вакцинопрофилактика) или анатоксина, и пассивную, при которой вводят иммунную сыворотку или иммуноглобулины, а также пассивно-активную, когда вначале вводят иммунную сыворотку, а затем вакцину или анатоксины.

Вакцинация (лат. vacca, корова) — введение антигенного материала в организм с целью вызвать иммунитет к болезни.

Ревакцинация — повторная вакцинация в течение короткого (несколько недель) промежутка времени.

Иммунные сыворотки — препараты из крови животных, содержащие антитела против возбудителей инфекционных заболеваний или продуктов их жизнедеятельности.

Инактивированные вакцины, не содержащие живых микроорганизмов. Такие вакцины принципиально не могут привести к развитию прививаемой болезни, но они менее эффективны по сравнению с живыми, поскольку создают менее напряженный иммунитет. Также наличие адъювантов или консервантов в составе вакцины может привести к более высокому риску аллергических осложнений.

Адъювант (лат. adjuvans, adjuvantis, помогающий, способствующий) — вещество, повышающее иммунный ответ организма на антиген (для вакцин используются гидроксид алюминия, квасцы, органические или минеральные масла и др.)

Живые (MLV) вакцины, содержащие штаммы микроорганизмов с ослабленной вирулентностью либо лишенных вирулентных свойств, но полностью сохранивших иммуногенные свойства. Этот вид вакцин имеет высокую эффективность, но требует тщательного соблюдения условий применения.

Вирулентность микроорганизма (лат. virulentus, ядовитый) — сумма свойств микроба, определяющая его болезнетворное действие (инфекционность, способность к колонизации, инвазивность, токсигенность, способность к длительному персистированию, величина инфицирующей и летальной дозы).

Аттенуированный (ослабленный) штамм — вид микроорганизмов с пониженной вирулентностью либо лишенных вирулентных свойств, но полностью сохранивших иммуногенные свойства. Аттенуированные штаммы вирусов и бактерий получают путем генетических модификаций, выращивания микроорганизмов в неблагоприятных условиях.

Ассоциированная вакцина (комбинированная, комплексная, поливакцина) — препарат, состоящий из нескольких вакцин различного типа, предназначенный для одновременной иммунизации против нескольких инфекционных болезней.

Поливалентная вакцина — препарат, состоящий из нескольких штаммов, типов или вариантов возбудителя одной болезни.

Сокращения наименований вакцин:

Публикация схемы разрешена при наличии ссылки на эту страницу!

Понравилась схема?
Рекомендуте нас друзьям! →

Источник

Расшифровка результатов теста на антитела к коронавирусу – таблица

Что такое антитела к коронавирусу?

Антитела (другое название – иммуноглобулины) – это специальные белки, которые вырабатываются и (или) продуцируются плазматическими клетками.

Что делают иммуноглобулины?

Иммуноглобулины образуются в ответ на попадание в организм чужеродных бактерий или вирусов. Они взаимодействуют с антигеном (специфическим участком вредителя) и обезвреживают его.

Таким образом наш иммунитет стоит на страже нашего здоровья.

Какие классы иммуноглобулинов существует?

Выделяют 5 классов иммуноглобулинов, некоторые из которых содержат подклассы.

IgA – секретируются на поверхности эпителия и присутствуют в слюне, слезе, на поверхности слизистых.

IgM – обнаруживается при первичном попадании антигена. Указывает на острый инфекционный процесс у человека.

IgG – основной класс иммуноглобулинов, защищающий от вирусов, бактерий, токсинов.

IgD – обнаруживают на поверхности развивающихся B-лимфоцитов. Функция не установлена.

IgE – секретируются при аллергической реакции немедленного типа.

Методы определения антител к коронавирусу

Существуют два метода определения иммуноглобулинов к коронавирусу в организме человека – ИФА и ИХА.

Иммуннохроматографический анализ – это качественный метод определения иммуноглобулинов классов М и G.

Качественный метод – это метод, позволяющий только определить наличие антител в организме. Иными словами, ответить на вопрос – есть они или нет.

Иммуноферментный анализ – это количественный метод определения иммуноглобулинов.

Количественный метол – не просто говорит о наличии антител, но и показывает их количество в единице объема крови.

Для анализов проводят забор венозной крови, следовательно, подготовка к процедуре стандартная:

Проводить исследование на пустой желудок (не есть за 8 часов до процедуры).

Воздержаться от питья воды за час до забора крови.

Для курильщиков – не курить за 2 часа до процедуры.

Что выбрать – качественный или полуколичественный анализ?

Для чего проводится качественный и количественный анализ?

Качественный анализ позволяет ответ на 2 вопроса:

Полуколичественный тест позволяет ответить на эти вопросы, а также определить количество иммуноглобулинов в организме.

Для чего определять количество иммуноглобулинов?

Определение количества антител позволяет определить, сформирован ли долговременный иммунитет. Именно он защищает на организм от повторного заболевания коронавирусом.

Показания к проведению исследования

Показаниями к проведению анализа является:

Наличие симптомов общего недомогания. В этом случае тестирование проводится для подтверждения диагноза.

При контакте с носителем или больным коронавирусной инфекцией.

По желанию – для лабораторной оценке иммунного статуса.

Как проводится тест

Необходимо прийти в Клинику МЕДЕЛ по предварительной записи.

Процедура проводится путем забора крови.

В Клинике МЕДЕЛ результаты изготавливаются в течение 1 дня.

Источник

Вирусная нагрузка. Что это за показатель и как правильно его интерпретировать.

Современные возможности ПЦР диагностики COVID-19 в лаборатории ДИЛА позволяют ответить на несколько действительно важных вопросов:

От показателя ВН (высокая, средняя, низкая) напрямую зависит заразность инфицированного человека для окружающих.

Интенсивнее всего вирус размножается за 1-3 дня до появления симптомов и в первые 5-7 дней после первых проявлений. В этот период количество вирусов в 1 мл выделений из носоглотки может составлять сотни тысяч и миллионы частиц, что соответствует среднему и высокому показателю вирусной нагрузки и делает пациента максимально заразным для окружающих. Затем количество вирусов, выделяемых человеком начинает снижаться. Обычно начиная с 7-10 дня от начала клинических проявлений человек перестает быть заразным, что соответствует снижению показателей вирусной нагрузки. В этот период вирусная РНК в анализе еще может выявляться (ПЦР позитивный с низким уровнем ВН), однако большинство исследований показывает, что после 10 дня клинических проявлений вирус теряет свою способность к репликации (размножению), а значит, и способность заражать других людей.

Как определяется ВН и что значит показатель Сt*

Как понимать полученный результат исследования

Если значение Ct низкое (5-15), это говорит о том, что вирусная нагрузка высокая и вирус SARS COV-2 передает свою генетическую информацию и размножается очень активно, образуя новые вирусные РНК в большом количестве и тем заразнее человек.

Если вирусных частичек мало, для их выявления нужно большее количество циклов. Чем выше значение порогового цикла (Ct=30-35-40), тем меньше вирусных частиц находится в образце.

Результат ПЦР отрицательный в том случае, если РНК вируса выявить не удается даже при самом высоком пороговом цикле чувствительности прибора – более 40 циклов амплификации (Сt больше 40: РНК SARS COV-2 не выявлена).

Сt 5-27.
Высокая ВН

Сt 28-34.
Средняя ВН

Человек болен COVID-19, есть риск заражения окружающих.

Рекомендуется:

Человек заражен COVID-19, есть риск заражения окружающих.

Рекомендуется:

Ct 35-40.
Низкая ВН

Человек болен COVID-19, риск заражения окружающих сохраняется, но он вероятно низок. Возможно самое начало заболевания.

Рекомендуется:

Человек заражен COVID-19. Чаще всего это может быть в период выздоровления (выведения вируса).

Рекомендуется (если был контакт с больным COVID-19):

Риск заражения окружающих отсутствует.

Возможно:

Для уточнения диагноза рекомендуется:

Риск заражения окружающих отсутствует.

Тест на імуноглобуліни класу G допоможе уточнити, чи перехворіли ви на коронавірусну інфекцію раніше.

При обнаружении любого из определяемых генов коронавируса результат теста является положительным, что означает присутствие вируса в организме.

Важно помнить, что клинические проявления заболевания могут отсутствовать при любом уровне вирусной нагрузки. При положительном результате ПЦР с высоким уровнем вирусной нагрузки и отсутствии симптомов заболевания (бессимптомном течении) вы высоко заразны для окружающих, поскольку из носоглотки выделяется много вирусов при дыхании, разговоре. Для контроля снижения заразности можно провести повторное ПЦР-тестирование с определением уровня вирусной нагрузки через 7-10 дней

Источник

Сколько антител G должно быть для безопасности от коронавируса?

Трактовка результатов исследования крови на антитела перед и после вакцинации. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ определение уровня антител к спайковому (S) белку SARS-CoV-2, IgG.

Центр им. Н.Ф. Гамалеи в России провел собственное исследование вместе с департаментом здравоохранения города Москвы. Эта работа была сделана на 4 тыс. москвичей.
Директор Центра им. Н.Ф. Гамалеи Александр Гинцбург — «Мы выяснили, что 300 антител (международных единиц) BAU защищают от «Дельты» полностью.
Если меньше, то нужно вакцинироваться «Спутником Лайт».
Если в результате вакцинации «Лайтом» вы получили 350–400, то можно провакцинироваться вторым компонентом «Спутника».
Если у вас 500 единиц и больше, то это идеально для защиты от заражения COVID-19″.

Перевод в Abbott AU/мл (Ед/мл)

300 BAU/мл – 2113 AU/мл (Ед/мл)
350 BAU/мл – 2565 AU/мл (Ед/мл)
400 BAU/мл – 2817 AU/мл (Ед/мл)
500 BAU/мл – 3522 AU/мл (Ед/мл)

Ниже обобщенные международные данные, до публикации Центра им. Н.Ф. Гамалеи

Данные по количественному анализу BAU/мл

Результаты теста по BAU/мл, для перевода в Abbott AU/мл (Ед/мл) необходимо значение, разделить на 0,142. Например: 30 / 0,142 = 211

Появление и количество антител после болезни и вакцинации изображено на графике международного исследования:

BAU (Binding Antibody Units) – единицы связывающих антител, используемые в Первом международном стандарте ВОЗ для антител к SARS CoV-2 (NIBSC code 20/136), относительно которого аттестованы калибраторы применяемой тест-системы.

Abbott AU (Arbitrary Unit) – условные единицы концентрации антител Abbott Laboratories – Эбботт Лэбораториз.

Математическое соотношение единицы Abbott AU/мл (Ед/мл) с единицей ВОЗ (единица связывания антител на мл [BAU/мл]) описываться уравнением: BAU/мл = 0,142 х AU/мл.‌‌

НОВЫЕ ДАННЫЕ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТА Abbott AU:

150 BAU/мл – «Положительно;. Защищает

Ориентировочная градация для данной тест-системы (по данным производителя):

Значение 5.680 по BAU/мл это 40.000 Ед/мл Abbott AU/мл.

На графике видно максимальная точка по результатам исследований пациентов, около 10.000 по BAU/мл в Ед/мл Abbott AU/мл это около 70.000.

Таблицы пересчета условных единиц, установленных производителем (изготовителем), в BAU/мл

«ДиаСорин С.п.А.», Италия

Единицы измерения установленные производителем:
AU/мл
Коэффициент пересчета:
BAU/мл = ваш результат теста * 2,6
Результат анализа умножить на 2,6

«Рош Диагностикс Гмбх», Германия

Единицы измерения установленные производителем:
E/мл
Коэффициент пересчета:
BAU/мл = ваш результат теста / 0,972
Результат анализа разделить на 0,972

«Эббот Ирландия, Диагностическое подразделение»

Единицы измерения установленные производителем:
AU/мл
Коэффициент пересчета:
BAU/мл = ваш результат теста * 0,142
Результат анализа умножить на 0,142

«Шэньчжэнь Майндрэй Био-Медикал Электроникс ко., Лтд.»

Единицы измерения установленные производителем:
Eд/мл
Коэффициент пересчета:
BAU/мл = ваш результат теста / 1,32
Результат анализа разделить на 1,32

АО «Вектор-Бест»

Единицы измерения установленные производителем:
BAU/мл
Коэффициент пересчета:
BAU/мл = ваш результат теста
Вектор Бест выдает данные в BAU/мл

«ЕВРОИММУН Медицинише Лабордигностика АГ»

Единицы измерения установленные производителем:
Ед/мл
Коэффициент пересчета:
BAU/мл = ваш результат теста * 3,2
Результат анализа умножить на 3,2

Интерпретация результата BAU по информации:

По информации производителя реагентов (Abbott Laboratories – Эбботт Лэбораториз), основанной на результатах первого исследования Международного стандарта ВОЗ иммуноглобулина против SARS-CoV-2 (человека) (код NIBSC 20-136), которое продемонстрировало прекрасную корреляцию (r = 0,9990) с текущей стандартизацией количественных тест-систем SARS-CoV-2 IgG II Quant: математическое соотношение единицы Abbott AU/мл (Ед/мл) с единицей ВОЗ (единица связывания антител на мл [BAU/мл]) будет описываться уравнением: BAU/мл = 0,142 х AU/мл.‌‌

Установленная количественная связь с Международным стандартом ВОЗ может помочь в стандартизации серологических тестов на SARS-CoV-2 и обеспечить лучшую гармонизацию данных между лабораториями.

Количественное определение антител к рецептор-связывающему домену спайкового белка коронавируса SARS-CoV-2 (в том числе нейтрализующих), для определения и оценки иммунного ответа после естественной инфекции или вакцинации препаратами на основе S-белка (в том числе Гам-КОВИД-Вак – «Спутник V»).

Исследование крови проводят при подозрении на бессимптомную инфекцию SARS-COV-2 в недавнем прошлом, после заболевания COVID-19, до проведения вакцинации, а также после иммунизации.

Синонимы:
Анализ крови для количественного определения IgG-антител к спайковому (S) белку SARS-CoV-2;
Количественное определение IgG антител к RBD домену S-белка SARS-CoV-2;
IgG Антитела к коронавирусу SARS-CoV-2, включая нейтрализующие IgG;
Тест на IgG антитела к спайковому (S) белку коронавируса; Антитела к рецептор-связывающему домену вируса, вызывающего COVID-19, Иммунитет к коронавирусу SARS-CoV-2; Антитела класса G к SARS-CoV-2 RBD; Анти-RBD антитела класса G.

SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 – тяжелого острого респираторного синдрома коронавирус 2) – официальное наименование вируса, вызвавшего эпидемию COVID-19.

COVID-19 (coronavirus disease 2019 – коронавирусная болезнь 2019) – название болезни, которую индуцирует новый вид коронавируса. Источником передачи инфекции SARS-CoV-2 является, в большинстве случаев, больной человек, в том числе находящийся в инкубационном периоде заболевания, который составляет от 2 до 14 (в среднем 5-7) дней.

SARS-CoV-2 стимулирует гуморальный и клеточный ответ иммунной системы инфицированного человека. Гуморальный ответ характеризуется продукцией антител IgM и IgG классов, которые способны специфически распознавать и связывать чужеродные белки, характерные для патогена, участвуя в механизмах его нейтрализации и удаления. Антитела класса IgM появляются первыми, через несколько дней от появления симптомов. Почти одновременно или вскоре вслед за ними появляются IgG (более, чем у половины пациентов в период 8-14 дней от возникновения клинических признаков инфекции, а в период от 15 дней и более – у 99% пациентов).

По уровню и динамике концентрации антител в крови гуморальный иммунный ответ индивидуально варьирует, в том числе в зависимости от тяжести болезни. Уровень IgM снижается до неопределяемого обычно в пределах до одного, реже – двух месяцев от начала заболевания, в то время как IgG антитела могут сохраняться в крови длительное время (3-5 месяцев и более), выполняя защитную функцию.

Четыре структурных белка, которые кодирует РНК вируса SARS-CoV-2, – это спайковый (S), оболочечный (E), нуклеокапсидный (N) и мембранный (M). Структуры, выступающие на поверхности вируса подобно шипам и придающие вириону сходство с короной, сформированы спайковым (S) белком. S-белок состоит из двух субъединиц (S1 и S2). Нуклеокапсидный и спайковый белки в ходе инфекции вызывают наиболее выраженный антительный ответ. При этом нейтрализующая активность антител, вырабатываемых против SARS-CoV-2, преимущественно соотносится с антителами к S-белку (который является главной мишенью в вакцинологии).
На S1 субъединице этого белка располагается рецептор-связывающий домен (RBD), который способен прочно связываться с рецепторами ангиотензин-превращающего фермента (ACE2), расположенными на клетках различных тканей, в том числе на эпителии легочных альвеол. Взаимодействие RBD домена с рецепторами ACE2 является начальным этапом внедрения вируса в клетку. Антитела, специфически связывающиеся с RBD областью S1 субъединицы спайкового белка коронавируса, способны ингибировать его связывание с клеточными рецепторами, оказывая выраженный нейтрализующий эффект.

Присутствие специфических антител к вирусу SARS-CoV-2 класса G указывает на факт недавнего или прошлого взаимодействия с вирусом. Поэтому такие тесты используют в комплексной диагностике при наличии подозрений на инфекцию новым коронавирусом или ее осложнения. Основной метод лабораторного подтверждения острой инфекции COVID-19 – выявление методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) РНК вируса в биоматериале, взятом из дыхательных путей, обычно в мазке из носоглотки и ротоглотки. Однако информативность РНК-тестирования зависит от достаточности содержания вируса в биоматериале выбранной локализации на той или иной стадии инфекции, а также качества взятия материала.

Наиболее информативны ПЦР-исследования мазков из рото- и носоглотки в первые 1-5 дней от начала клинических проявлений инфекции. На более поздних сроках (более 1-2 недель) целесообразно дополнительно к ПЦР-тестированию мазков применять исследование крови на наличие специфических антител, вырабатываемых организмом в ответ на инфекцию SARS-CoV-2.

Оценка уровня IgG антител к SARS-CoV-2 может использоваться также с целью выявления иммунологических свидетельств прошлой (в том числе субклинической или бессимптомной) инфекции для оценки вероятного иммунного статуса обследуемого человека по отношению к этому вирусу, прослеживания контактов, популяционных эпидемиологических исследований. Поскольку большинство зарегистрированных и разрабатываемых вакцин против SARS-CoV-2 нацелено на антитела к S-белку, количественное определение уровня IgG антител к SARS-CoV-2 S-белку (RBD) может быть информативным методом оценки динамики иммунного ответа на вакцинацию такими препаратами (в частности, для оценки ответа на применение вакцины Гам-КОВИД-Вак – «Спутник V»).

Следует отметить, что результаты предлагаемого теста количественного исследования IgG антител к SARS-CoV-2 S-белку (RBD), независимо от используемой антигенной мишени, нельзя считать прямым методом определения нейтрализующих антител, поскольку оценка нейтрализующей активности антител требует специальных методов, малодоступных для рутинного практического использования. Но результаты этого теста проявляют очень высокую корреляцию с результатами тестов нейтрализации при проведении параллельных исследований.

Источник научное исследование
Источник текста описания компания Invitro.
Источник по BAU
Источник обновленных данных
Источник таблиц пересчета

‌ Через сколько дней после вакцинации проверить антитела? Ответ: 42

Без антител болезнь вероятна, как сейчас поражает индийский коронавирус. История болезни индийским штаммом коронавируса «Дельта» от первого лица.

Источник

Способность препарата Эргоферон подавлять инфицирующую активность респираторно-синцитиального вируса in vitro

Опубликовано в журнале:
« ИММУНОЛОГИЯ » № 4, 2015 Шиловский И.П., Прозорова М.С., Хаитов М.Р.
ФГБУ ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА, 115 478, г. Москва

Вирусные инфекции нижних отделов респираторного тракта являются одной из основных причин заболеваемости и смертности среди детей, людей пожилого возраста и лиц с иммунодефицитными состояниями. Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) является наиболее частой причиной бронхитов, бронхиолитов и пневмоний у новорожденных детей. ежегодно в мире регистрируется до 1 млн смертельных исходов РСВ-инфекции. Большинство существующих препаратов против РСВ недостаточно эффективны, дороги и зачастую имеется риск развития осложнений при их применении. Препарат «Эргоферон» представляет собой комплекс на основе смеси поликло-нальных антител к интерферону гамма, рецептору CD4 и гистамину в релиз-активной форме. В рамках данного исследования препарата «Эргоферон» было проведено изучение его возможного влияния на инфицирующую способность РСВ. Показано, что предварительная инкубация препарата с вирусным материалом приводит к двукратному снижению его инфицирующей способности. Предположительно эффект препарата реализуется через воздействие на вирусные белки RSV-G и RSV-F, которые необходимы для проникновения вириона в клетки-мишени.

Ключевые слова: респираторно-синтициальный вирус; РСВ-инфекции; противовирусные препараты.

Введение

В настоящее время ведется поиск и разработка эффективных лекарственных средств для лечения и профилактики РСВ. Однако эффективность зарегистрированного противовирусного препарата рибавирина, применяемого при РСВ инфекциях, ставится под сомнение некоторыми авторами, кроме того, его высокая стоимость и риск осложнений сильно ограничивают его широкое применение [3]. Попытки создать эффективную вакцину против РСВ также не имели успеха. В качестве альтернативы противовирусным препаратам предлагается использование моноклональных антител, способных препятствовать распространению вируса внутри респираторного тракта. Несмотря на эффективность, препараты этой группы имеют и ряд недостатков, в числе которых высокая стоимость лечения, непродолжительность протективного действия, а также необходимость госпитализации для проведения курса внутривенного введения иммуноглобулина. Тем не менее на сегодняшний день на рынке существует группа препаратов, представляющая собой антитела в релиз-активной форме, для которой показана противовирусная активность широкого спектра. Кроме того, препараты этой группы безопасны и разрешены к применению у детей, в том числе у детей младшего возраста. Фармакологические свойства этих препаратов позволяют использовать их длительное время, в том числе для профилактики вирусных заболеваний.

Препарат «Эргоферон» (производство компании ООО НПФ «Материа Медика Холдинг») представляет собой комплекс на основе смеси поликлональных антител к интерферону гамма, рецептору cD4 и гистамину в релиз-активной форме [8]. В ходе ранее проведенных исследований in vitro была показана противовирусная активность Эргоферона в отношении РСВ: препарат подавлял репликацию РСВ в клетках, значимо снижая вирусную нагрузку [4]. В рамках продолжения исследования препарата «Эргоферон» было проведено изучение характера противовирусной активности Эргоферона и оценка его возможного влияния на инфицирующую способность РСВ.

Материал и методы

Клеточная линия, питательные среды, штамм вируса

Исследование проводилось на культуре клеток эмбриональной почки макаки МА-104, которая является чувствительной к РСВ [5]. Для культивирования клеток использовалась полная среда DMEM, содержащая 600 мг/л L-глутамина, 80 мг/л гентамицина, 20 mM буфера Hepes, 10% фетальной бычьей сыворотки. Для заражения клеток использовался респираторно-синцитиальный вирус штамм A2(источник: Airway Disease Infection Section and MRc & Asthma UK centre in Allergic Mechanisms of Asthma national Heart and Lung Institute, Imperial college London, UK). Исходный титр вируса 1–3×10 6 TCID₅₀/мл. После заражения клетки культивировали в поддерживающей бессывороточной среде DMEM (1200 мг/л L-глутамина, 80 мг/л гентамицина, 20 mM буфера Hepes).

Оценка цитотоксического действия растворителя.

Оценка противовирусной активности Эргоферона.

Тестирование образцов проводилось на культуре клеток эмбриональной почки макаки МА-104. В качестве контроля использовалась вода очищенная, прошедшая технологическую обработку аналогичную Эргоферону (Контроль 1), и вода очищенная без какой-либо технологической обработки (Контроль 2). Клетки засеивали в 96-луночный планшет в количестве 20 тыс. кл. на лунку в объеме 100 мкл полной среды DMEM. На второй день эксперимента готовили смесь исследуемых образцов и вируса РСВ-A2 в объемном соотношении 1:3 (125 мкл препарата и 375 мкл вируса с титром 1-3 х 10 6 TCID₅₀/мл) и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Перед внесением смеси образцов и вируса в культуру клеток планшеты с клетками отмывали стерильным физиологическим раствором 100 мкл/лунку, после чего вносили по 100 мкл/лунку бессывороточной среды.

Затем в культуру клеток вносили смесь вируса и исследуемых образцов и титровали, разводя смесь в десять раз. Использовали следующие разведения смеси: без разведения, 1/10, 1/100, 1/1тыс, 1/10 тыс., 1/100 тыс., 1/1 млн. Каждая точка разведения ставилась в четырех повторах. После внесения смеси вируса и препаратов в лунки, клетки инкубировали в течение 3-5 суток в СО₂-инкубаторе при 37°С до появления цитопатического действия. После чего проводили оценку противовирусной активности препарата визуально с помощью световой микроскопии, а именно подсчитывали количество бляшек (синцитиев), образовавшихся на монослое в результате репродукции вируса. Эксперимент был поставлен в 10 независимых повторах.

Статистическая обработка результатов.

Результаты отражают показатели TCID₁₀, TCID₅₀ и TCID₉₀, представляемые в виде прогнозируемого значения степени разведения (титра) вируса в экспериментальной культуре клеток с 95% доверительными интервалами. Таким образом, протективное действие препарата должно проявляться в снижении титра вируса на уровне TCID₁₀, TCID₅₀ или TCID₉₀, т.е. возникновение цитопатогенного эффекта на указанных уровнях должно происходить в культуре с бóльшей концентрацией вируса по сравнению с Контролями 1 и 2.

Полученные кривые и рассчитанные показатели цито-токсичности в группах Эргоферона, Контроля 1 и Контроля 2 сравнивались между собой методом нелинейных смешанных моделей. Полученные отличия считались статистически значимыми при p Pезультаты и обсуждение

Оценка цитотоксического действия растворителя Клетки, к которым добавляли неразбавленную стерильную дистиллированную воду (положительный контроль), погибали из-за осмотического шока, и, соответственно, средняя оптическая плотность в данном случае была низкой. Клетки, которые инкубировались в неразведенной питательной среде DMEM (отрицательный контроль), не проявляли признаков цитотоксичности. При внесении в культуру клеток растворителя препарата «Эргоферон» в чистом виде (без разведения средой) наблюдалась выраженная осмотическая цитотоксичность, поскольку растворитель представляет собой очищенную воду. При разведении образца в 2 раза средой DMEM выраженной гибели клеток не происходило, однако наблюдался замедленный рост и сниженная жизнеспособность клеток, что выражалось в снижении оптической плотности почти в 2 раза по сравнению с отрицательным контролем (средой DMEM). По всей видимости, такой эффект обусловлен разведением питательной среды и снижением концентрации ее компонентов, необходимых для роста и жизнедеятельности клеток. При внесении в клетки растворителя препарата в разведении 1/4 и выше не наблюдалось изменения оптической плотности (рис. 1), поэтому в дальнейших экспериментах использовалось разведение исследуемых препаратов средой DMEM в соотношении 1/4, которое исключало неспецифическое цитотоксическое действие растворителя (воды очищенной) при изучении противовирусного действия Эргоферона.

Рис. 1. Изменение оптической плотности в зависимости от разведения растворителя
питательной средой в МТТ-тесте.
Для контролей линиями указаны показатели оптической плотности для раствора контроля без разведения (неразведенная питательная среда DMEM и стерильная дистиллированная вода соответственно).

Оценка противовирусного действия препарата «Эргоферон».

Было показано, что при внесении к образцам клеток препарата «Эргоферон» в смеси (1:3v/v) с вирусом РСВ штамма A2 (исходный титр 1–3×10 6 TCID₅₀/мл), полученные значения титра вируса на уровне TCID₁₀и TCID₅₀в группе Эргоферона являются наименьшими из всех тестируемых групп (рис. 2, см. таблицу).

Противовирусная активность исследуемых образцов при разведении 1/4.
Титр вируса на уровне TCID₁₀, TCID₅₀ и TCID₉₀ по данным пробит-анализа

Методом нелинейных смешанных моделей было показано статистически достоверное (p 10и TCID₅₀в группе Эргоферона по сравнению с Контролями. Значения TCID₁₀ составили 99,3 [64,6–194,6](×10 3 ) /мл против 261,5 [160,7– 571,7] (×10 3 )/мл и 264,5 [153,6-614,99] (×10 3 ) /мл для Эргоферона, Контроля 1 и Контроля 2 соответственно. Значения TCID₅₀ составили 28,03 [19,5–40,4](×10 3 ) /мл и 58,8 [39,7– 87,5](×10 3 ) /мл, для Эргоферона, Контроля 1 и Контроля 2 соответственно. Полученные данные свидетельствуют о наличии у Эргоферона противовирусного эффекта в отношении вируса РСВ штамма A2.

Рис. 2. Противовирусная активность Эргоферона: показатели гибели клеток MA-104,
зараженных разными дозами респираторно-синцитиального вируса.

Представлены расчетные значения титра вируса на уровнях TCID₁₀, TCID₅₀ и TCID₉₀, полученные методом пробит-анализа на основании выживаемости клеток при заражении вирусом РСВ штамма А2 после его инкубации с образцами (в разведении 1/4) в течение 1 ч.
* – титр вируса на уровне TCID₅₀ в группе Эргоферона статистически значимо ниже такового в группах Контроля 1 и 2 (p 10 в группе Эргоферона статистически значимо ниже такового в группах Контроля 1 и 2 (p

Механизм инфицирующего действия РСВ опосредован белком вируса RSv-G, обеспечивающего адгезию к клетке [6], и RSv-F, обеспечивающего слияние оболочки вируса с мембраной клетки [7]. Показано, что с переводом в релиз-активную форму характер действия антител меняется и релиз-активные формы антител приобретают особое свойство оказывать модифицирующее действие на структуру исходного вещества, или же структурно сходные белки, вызывая конформационные изменения этих молекул, что сопровождается изменением физико-химических и биологических свойств [8]. Это позволяет предположить, что Эргоферон, содержащий антитела в релиз-активной форме, способен выполнять роль аллостерического модулятора, воздействующего на вирусные белки RSv-G и RSv-F, что снижает способность вирусных частиц связываться с клетками и проникать в них.

Эти предположения о механизме действия препарата «Эргоферон» требуют дополнительных исследований для своего подтверждения. Тем не менее, полученные в данном исследовании и предыдущих экспериментах [4, 9] результаты позволяют утверждать, что Эргоферон является перспективным препаратом с комбинированным противовирусным, противовоспалительным и антигистаминным действием. Отдельное исследование in vitro не позволяет реализовать в полном объеме все возможные эффекты Эргоферона, поскольку его трехкомпонентная формула рассчитана на реализацию фармакологического действия в отношении различных компонентов иммунной системы, в частности на усиление противовирусного клеточно-опосредованного иммунного ответа, а также на воздействие на группу провоспалительных медиаторов. Системное противовирусное действие Эргоферона in vivo будет более выражено, поскольку позволит реализовать эти комбинированные эффекты.

Заключение

Таким образом, подводя итог проведенного исследования, выявленное в данной работе прямое противовирусное действие Эргоферона в отношении РСВ позволяет утверждать, что препараты на основе релиз-активных разведений антител способны восполнить недостаток действенных противовирусных средств, т.к. они могут проявлять активность широкого спектра, как в плане целевых вирусных агентов, так и в плане реализуемых механизмов фармакологической активности.

Источник