Чем оплодотворяют яйцеклетку при эко

Чем оплодотворяют яйцеклетку при эко

Успешно лечим бесплодие

Пациенты со всего мира

Рождённых с помощью клиники

После получения эякулята проводится спермограмма для окончательного выбора метода оплодотворения ооцитов – обычное ЭКО (когда очищенная фракция активноподвижных сперматозоидов добавляется в среду, в которой культивируются ооциты, оплодотворение происходит самостоятельно) либо ИКСИ (интрацитоплазматическая инъекция сперматозоида в ооцит, требуется при недостаточной концентрации, подвижности или морфологии сперматозоидов, при наличии высоких концентраций антиспермальных антител в сперме, при отсутствии оплодотворения в предыдущей попытке ЭКО, при проведении преимплантационной генетической диагностики на моногенные заболевания, а также в ряде других случаев).

Качество спермы у мужчин очень вариабельно и подвержено влиянию многих факторов, поэтому нередко спермограмма на момент пункции значительно отличается от полученной в ходе предварительного обследования, что иногда влечет за собой изменение запланированного на этапе подготовки к ЭКО метода оплодотворения. В таком случае пациентов обязательно ставит в известность лечащий врач или эмбриолог.

Оплодотворение выбранным методом обычно проводится через 3-6 часов после пункции, это время нужно для окончательного дозревания ооцитов, а также для их адаптации к условиям вне организма. После оплодотворения ооциты помещаются в индивидуальные капли среды под слоем минерального масла в чашке Петри в инкубатор, поддерживающий постоянные условия температуры, влажности и кислотности среды.

Через 16-18 часов после оплодотворения (1й день развития) оценивается наличие в цитоплазме ооцитов 2-х пронуклеусов (мужского и женского), что свидетельствует о нормально прошедшем оплодотворении. Уже на этой стадии по ряду признаков можно отличить перспективные в дальнейшем зиготы (оплодотворенные ооциты) от неперспективных. При наличии в цитоплазме 3-х и более пронуклеусов, зиготы считаются оплодотворенными неправильно и такие эмбрионы отбраковываются. Это может быть вызвано проникновением более одного сперматозоида при оплодотворении или неотделением второго полярного тельца у ооцита. При отсутствии пронуклеусов в цитоплазме или наличии всего одного пронуклеуса, за зиготами проводится дальнейшее наблюдение, в данном случае возможно запаздывание процесса оплодотворения. Такие эмбрионы остаются в резерве и переносятся в полость матки только при отсутствии эмбрионов, развившихся из нормально оплодотворенных зигот. Каждая зигота фотографируется, и результат описывается в эмбриологическом протоколе.

На вторые сутки развития оценивается количество клеток в эмбрионе, степень фрагментации (объем, который занимают внеклеточные кусочки цитоплазмы), равномерность дробления эмбрионов и др. Обычно в этот период эмбрион состоит из 2-6 клеток (бластомеров). Эмбрион вновь фотографируется и помещается в свежую культуральную среду, соответствующую его стадии развития. На второй день уже возможно проводить перенос эмбрионов в полость матки и/или криоконсервацию (замораживание).

На третьи сутки развития эмбрион обычно 4-10-клеточный, однако часто имеется большая вариабельность внутри группы эмбрионов одной супружеской пары. Какие-то развиваются медленнее, какие-то – быстрее, некоторые и вовсе останавливаются в развитии. Это нормально и отражает действие естественного отбора наиболее жизнеспособных. Чаще всего перенос эмбрионов проводят на третьи сутки развития, но в ряде случаев культивирование продолжают и дальше. Показанием для этого может быть, например, наличие большого количества эмбрионов хорошего качества, выбор из которых затруднен, а также ряд других причин.

На четвертые сутки развития хорошо прогрессирующие эмбрионы дорастают до стадии морулы – границы между клетками сглаживаются, эмбрион приобретает форму шара с небольшими выпуклостями (от лат. morulae – тутовая ягода). Еще раз сменяется среда культивирования, проводится оценка качества эмбрионов. Перенос на четвертый день практикуется редко.

На пятые сутки развития в идеале эмбрион дорастает до стадии бластоцисты – многоклеточного эмбриона с полостью и двумя популяциями клеток – внутренней клеточной массой (она даст начало всем тканям будущего эмбриона) и трофобласта (из него сформируются все внезародышевые оболочки – плацента, хорион). До этой стадии дорастают обычно не все эмбрионы, а только самые сильные и имеющие наибольший шанс имплантироваться и развиваться дальше. Перенос на пятые сутки развития проводится примерно у 20% пациентов. Также в этот день проводится криоконсервация оставшихся после переноса эмбрионов хорошего качества.

Источник

Секреты хороших результатов в программах ЭКО+ИКСИ

Многие считают, что положительный исход ЭКО полностью зависит от репродуктолога. Но успех программы ЭКО+ИКСИ заключается в слаженной работе всех специалистов клиники, а также и от самих пациентов. Врач консультирует пациента, назначает анализы и готовит к программе. После осуществляется пункция яйцеклеток и подсаживается эмбрион. Врач контактирует с пациентом все время: при обследовании, во время участия в протоколе ЭКО, в период после процедур. Потому вполне логично, что при выборе клиники пациенты обращают внимание на репродуктолога, отношения, которые устанавливаются между ними и врачом. Но только ли от этого зависит итог участия в программе?

После пункции полученные ооциты передаются в лабораторию. И с данного момента будущее ребенка переходит в руки состава врачей-эмбриологов. Какой расходный материал, какие среды используются в лаборатории, насколько они стабильны, соблюдается ли температурный режим это все очень важно и для правильного оплодотворения, и для последующего культивирование эмбрионов. Клиника OXY-center при прохождении программ ЭКО+ИКСИ предоставляет только высококачественные расходные материалы, используются сертифицированные среды для культивирования. Здесь важна каждая деталь, и мы обращаем пристальное внимание на все мелочи процесса.

Рассмотрим кратко описание функционирования эмбриологической лаборатории, а также те работы, которые выполняет врач-эмбриолог.

Важность температурных режимов (термостабилизация) для всех эмбриологических процедур

Организм способен поддерживать постоянную температуру, причем этот процесс происходит с высокой точностью. При естественном зачатии яйцеклетка движется к матке при 37 градусах по Цельсию. Очень важно и при оплодотворении «в пробирке» (и других способах ВРТ) обеспечивать клеткам нужный температурный режим. Поэтому одна из целей эмбриолога приблизить условия проведения процедур в рамках протокола ЭКО к естественным и обеспечить ооцитам нужную температуру. Это же относится и к условиям созревания эмбрионов. Для этого в клинике «Oxy center» практикуют обеспечение термостабилизации.

Термостабилизация подразумевает прогрев всех инструментов, используемых при работе с эмбрионами и ооцитами: иглы для пункции, катетеры, пробирки для фолликулярной жидкости. Поддержание нужной температуры возможно благодаря специальным термостоликам, которыми оборудована эмбриологическая лаборатория.

Контроль уровня углекислого газа и температуры в инкубаторе

При манипуляциях, направленных на оплодотворение яйцеклетки, а также культивирование эмбриона, важно сохранять не только определенную температуру, но и уровень кислорода, влажности, углекислого газа. Используемые нашей клиникой инкубаторы имеют интегрированные термометры и сенсоры, которые регулируют и измеряют данные показатели. Однако для дополнительного контроля их необходимо снимать и вручную. Измерения проводятся нашими эмбриологами с помощью независимых приборов. Полученные показания сравнивают с теми, что высвечиваются на дисплее инкубатора.

Как проходит процедура

В день пункции эмбриолог в лабораторных условиях изучает сперму. Прежде, чем добавить сперму в среду с ооцитами, ее обрабатывают средствами для удаления семенной плазмы, очищают, центрифугируют, затем микроскопируют, определяют качество спермы и отправляют в инкубатор. Это проводится для получения полноценных и подвижных сперматозоидов. Полученные яйцеклетки врач-эмбриолог совместно с врачом-репродуктологом просматривает под микроскопом и отбирает лучшие, способные к оплодотворению, которые затем переносят в инкубатор с пониженным содержанием кислорода и соблюдением оптимальных условий для культивирования. Они воссоздают натуральную среду в организме будущей матери. Эмбрионы восприимичивы к загрязнению на молекулярном уровне, поэтому в лаборатории строго контролируется чистота и качество воздуха. Для этого применяется уникальная система фильтрации из нескольких стадий. За ее счет достигается стерильная для эмбрионов атмосфера.

Оплодотворение клеток производят по истечению нескольких часов после проведения пункции. Начальные стадии ИКСИ проводятся, как и стандартный цикл ЭКО. При ИКСИ врач-эмбриолог находит сперматозоиды (выбираются подвижные сперматозоиды с лучшей морфологией), обездвиживает их, «всасывает» и вводит в саму яйцеклетку с помощью микроиглы. Ооцит при этом закрепляется в определенном положении посредством микропипетки (холдинга) с противоположной стороны. Эта процедура требует аккуратности и внимательности, а для ее проведения необходим специальный микроманипулятор.

Этот алгоритм действий повторяется отдельно для каждого полученного ооцита. Яйцеклеточная мембрана обладает эластичностью, и минимальное отверстие от микроиглы быстро затягивается благодаря этому свойству мембраны. Далее эмбрионы в индивидуальных каплях специальной среды растут в инкубаторе. Проводится обязательный ежедневный мониторинг их развития. Есть еще три важных вопроса, решаемые репродуктолого и эмбриологом сообща: когда, сколько и какие эмбрионы подсаживать.

Когда и сколько переносить эмбрионов в маточную полость?

В нашей клинике этот вопрос решается индивидуально для каждой супружеской пары. На основании оценки качества эмбрионов, они могут быть перенесены на 3 или 5 сутки после пункции. Так же возможен двойной перенос (на 3 и 5 сутки). Перед началом переноса репродуктолог обсуждает с супругами эмбриологическую ситуацию: сколько имеется эмбрионов, какого они качества, сколько будет перенесено, сколько может быть подвергнуто криоконсервации витрификационным методом, то есть заморозкой, минуя стадию льда. Пациенткам OXY-center мы переносим в маточную полость не более 2-х эмбрионов, по международным стандартам, для понижения риска возникновения многоплодной беременности.

Какие эмбрионы отбираются для переноса?

Это очень важное решение. Принимает его врач-эмбриолог, оценивая эмбрионы непосредственно перед переносом. Лучшая стадия развития утро третьего дня, примерно через 65 часов после ЭКО+ИКСИ. Это 8-клеточный этап. До этого развитие эмбриона идет за счет запасов «материнских» ресурсов, которые накапливает за время роста и созревания яйцеклетка. Дальнейшее его развитие зависит от того, какой геном был сформирован и как своевременно произойдет переход развития на новый этап, зависит и дальнейший рост эмбриона. Как раз на этот период (стадия 4-8 бластомеров) и наступает замирание в развитии многих эмбрионов в результате ошибок в геноме, которые либо перешли от клеток родителей, либо возникли при их слиянии.

К 5 дню внутри эмбриона формируется полость, заполненная жидкостью, увеличивающаяся в размерах, а затем образуется бластоциста. При этом в самой бластоцисте, клетки подразделяются на два типа: те, из которых далее формируется плод (эмбриобласт), и те, из которых формируется плацента (трофобласт). Трофобласты отвечают за имплантацию эмбриона, то есть его крепление в эндометрий. Плацента даст начало внезародышевым оболочкам плода.

В чем заключается процедура переноса?

Большая часть женщин переживает эмбриональный перенос безболезненно: он осуществляется быстро и пациентка может не заметить окончания процедуры. Иногда, эмоционально лабильным женщинам может потребоваться поддержка психолога. При переносе в качестве инструмента применяется гибкий мягкий катетер, заполняемый питательной средой с содержанием одного или нескольких эмбрионов. Перенос происходит под контролем УЗИ, чтобы отслеживать движение среды с эмбрионами в маточной полости. Мы приглашаем приходить на перенос супруга, для психологической поддержки пациентки.

Шанс забеременеть после ИКСИ выше, чем при стандартном ЭКО, до 30%, поэтому мы используем в нашей клинике ЭКО+ИКСИ. После микроинъекции число оплодотворённых ооцитов 60%, а вероятность формирования эмбриона 95%. При необходимости, в ходе подготовки к ВРТ, врач-генетик обследует и консультирует супружескую пару. При знаичтельной вероятности проявления у будущего ребенка различных генетических патологий врач проводит кариотипирование обоих представителей пары, преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) эмбрионов. ПГД позволяет отобрать здоровые эмбрионы, которые затем перенесут в маточную полость, а также отсеять эмбрионы с риском отклонений. Данная процедура повышает возможность появления на свет генетически здорового ребенка, а также общую вероятность возникновения беременности при ЭКО+ИКСИ. Задача специалистов «Oxy center» заключается не только в преодолении бесплодия и сохранении ожидаемой беременности, но и при минимальном воздействии на организм матери помочь ей выносить и родить здорового и крепкого малыша.

Источник

Этапы ЭКО

Метод ЭКО представляет собой сложный процесс. Схематично он может быть представлен следующими этапами:

1 этап — мониторинг роста и созревания фолликулов при помощи ультразвуковых и (по показаниям) гормональных исследований. На этом этапе проводится индукция суперовуляции (то есть стимуляция созревания нескольких яйцеклеток в одном менструальном цикле). Для успешного осуществления ЭКО необходимо получить сразу несколько зрелых яйцеклеток в течение одного менструального цикла. Такую возможность, обеспечивающую больше шансов на успех, предоставляет использование гормональных препаратов — трипторелина (декапептила/диферелина), бусерелина или оргалутрана; пурегона/гонала или менопура; прегнила/хорагона или овитреля. Эти препараты позволяют контролировать течение менструального цикла и с предельной точностью рассчитать время созревания яйцеклеток. Однако на введение этих препаратов, как и на любой другой лекарственный препарат, может быть аллергическая реакция как местная (покраснение, инфильтрация), так и общая. Данные группы гормональных лекарственных средств (агонисты ГнРГ, мочевые или рекомбинантные гонадотропины) являются аналогами гормонов человека, участвующих в процессе роста и созревания яйцеклетки. Они обладают узконаправленным действием (обеспечивают созревание яйцеклеток), практически не оказывая других побочных эффектов.

День начала мониторинга (первого этапа программы ЭКО) зависит от возраста женщины, функционального состояния яичников. Женщины в возрасте до 35 лет, как правило, включаются в лечебный цикл с 19-21 дня менструального цикла, предшествующего циклу стимуляции (индукции суперовуляции). С этого времени начинается введение препаратов (декапептил/диферелин/бусерели), которые подготавливают яичники к стимуляции. С 1-3го дня следующего менструального цикла используются препараты (пурегон/гонал/менопур, прегнил и их аналоги), которые непосредственно стимулируют рост фолликулов и созревание яйцеклеток, а также рост эндометрия — внутреннего слоя матки, куда в последующем будет имплантироваться эмбрион. Женщины старше 35-40 лет, как правило, включаются в лечебный цикл с 1 дня менструального цикла. Менструальный цикл считается с первого дня месячных. День приезда (начало лечебного цикла) всегда согласуется с врачом клиники (возможно по телефону). Все процедуры проводятся амбулаторно.

Введение препаратов выполняется обученным средним медицинским персоналом. Услуги процедурного кабинета предоставляются согласно графику все дни недели, включая выходные и праздничные дни (по предварительной записи). При посещении процедурного кабинета просим пользоваться сменной обувью.

2 этап — пункция или аспирация фолликулярной жидкости, содержащей зрелые яйцеклетки. Пункция фолликулов выполняется трансвагинально (через своды влагалища) под контролем ультразвукового исследования. Из-за своей минимальной травматичности трансвагинальная пункция яичников выполняется амбулаторно. По желанию пациентов обезболивание может проводиться при помощи препаратов, вызывающих медикаментозный сон. Пункция яичников выполняется натощак. В день пункции в медицинский центр приходят оба супруга.

3 этап — эмбриологический. Полученные во время пункции фолликулов яйцеклетки помещают в специальные чашки с питательной средой. Во время эмбриологического этапа культуральные чашки находятся в инкубаторе, где поддерживаются условия, сходные с таковыми в материнском организме (точно такая же температура и содержание углекислого газа, кислорода). После получения яйцеклеток у женщины муж сдает сперму.

Для ЭКО отбираются только сперматозоиды, совершающие поступательные движения. Оплодотворение яйцеклеток проводят через 4-6 часов после пункции фолликулов. Только один сперматозоид из десятков тысяч необходим для оплодотворения одной яйцеклетки.

Обязательным условием перед сдачей спермы является предварительное воздержание от половой жизни в течение 2-7 дней. У большинства мужчин при 3-5и дневном воздержании состав спермы и качество сперматозоидов бывают наилучшими.

Сперматогенез во многом зависит от воздействия неблагоприятных факторов. Качество спермы существенно ухудшается под влиянием никотина, алкоголя, профессиональных вредностей, стрессовых ситуаций, при нервном и общем переутомлении, при острых и хронических заболеваниях. Планируя лечение в медицинском центре ЭКО, необходимо исключить влияние вредных факторов или свести его к минимуму. Необходимо помнить, что состав сперматозоидов полностью обновляется в течение трех месяцев. Поэтому, чем дольше мужчине удается соблюдать здоровый образ жизни, тем лучше результат.

4 этап — перенос эмбрионов в полость матки. Перенос эмбрионов проводят специальным атравматичным катетером, не прибегая к расширению цервикального канала, поэтому данная процедура является безболезненной, не требующей обезболивания.

В полость матки рекомендуется переносить не более 2-х эмбрионов, так как при переносе большего количества выше вероятность наступления многоплодной беременности.

Перенос эмбрионов возможно выполнять уже на вторые-третьи сутки после оплодотворения. При наличии к третьим суткам культивирования более 3 эмбрионов высокого качества перенос можно выполнить и на более поздних стадиях, вплоть до образования морулы или бластоцисты (преимплантационные стадии развития эмбриона), то есть на четвертые-пятые сутки после оплодотворения. В этом случае, как правило, переносят не более 2 эмбрионов, так как при длительном культивировании появляются дополнительные критерии оценки качества эмбриона, таким образом, выше шанс имплантации.

После подсадки эмбриона женщинам не требуется постельный режим, так как доказано, что это не является фактором, повышающим частоту наступления беременности.

Источник

Неудачи ЭКО: эмбриологический этап

Эффективность ЭКО в многом зависит от того, как протекает эмбриологический этап: от качества полученных женских и мужских половых клеток, от того, как произошло оплодотворение яйцеклеток, а потом как происходит развитие эмбрионов при культивировании. На каждом этапе может произойти сбой, который явится причиной неудачи ЭКО. Рассмотрим основные моменты.

У пациенток младше 35 лет, довольно редко, но также возможно получение яйцеклеток низкого качества. В таких ситуациях крайне сложно ответить на вопрос, с чем может быть это связано, но, как правило, с генетикой, с гормональной стимуляцией, эндометриозом, с различными эндокринными нарушениями (особенно часто с ожирением).

Сейчас активно ведутся исследования по изучению данного фактора бесплодия. Но, к сожалению, пока они не завершены и не имеют практического значения.

В случае установления ооцитарного фактора (а понять это возможно только при получении ооцитов при пункции фолликулов) предлагается замена протокола гормональной стимуляции, переход на ЭКО в естественном цикле. При неэффективности этих схем, переход на ЭКО с донорскими ооцитами.

Плохое качество сперматозоидов не так прямо связано с возрастом мужчины, больше с различными внутренними и внешними неблагоприятными факторами, но также может быть причиной неудач ЭКО.

2. Неправильное оплодотворение

Пронуклеусы в оплодотворённой яйцеклетке становятся видны через 12-14 ч после проникновения в неё сперматозоида. Через 19-22 часа пронуклеусы исчезают и формируется метафазная пластинка, а ещё через 3-4 часа начинается деление зиготы.

Встречаются следующие патологии формирования пронуклеусов:

— * оплодотворении одной яйцеклетки 2-мя сперматозоидами;

— * формирование 3-го пронуклеуса из материала невыделившегося второго полярного тельца;

— * формирование 3-го пронуклеуса путём аномального формирования ядерной мембраны ;

— реже встречаются >3 pn.

ИКСИ (введение одного сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки) не гарантирует правильного оплодотворения. Это объясняется главным образом сохранением второго полярного тела во время второго мейотического деления ооцита. Но 3 pn при этом варианте оплодотворения встречается реже, по разным данным

В неправильном оплодотворении могут играть роль следующие факторы:

— повышенные уровни эстрогенов в стимулированном цикле;

— продолжительность гормональной стимуляции;

— качество ооцита («гигантские» ооциты предрасположены к неправильному оплодотворению);

— поздний репродуктивный возраст женщины (по данным американских учёных H. J. Kang, Z. Rosenwaks частота оплодотворения и 3 pn достоверно выше у пациенток после 39 лет, несмотря на метод оплодотворения)

3. Остановка развития эмбрионов после правильного оплодотворения

В современных эмбриологических лабораториях процесс культивирования эмбрионов отработан до мелочей и тщательно соблюдается: индивидуальное культивирование эмбриона в планшетных инкубаторах; постоянный многоуровневый контроль условий культивирования; своевременная смена питательных сред, если культивирование происходит в двухступенчатых средах.

Поэтому при стабильных условиях культивирования, причину плохого развития остается искать только в качестве самого материала.

На остановку эмбриогенеза влияет качество как самих яйцеклеток, так и качество сперматозоидов.

Как правило, основное влияние на ход эмбриогенеза оказывает возраст родителей. Хотя и в молодом возрасте может наблюдаться снижение качества яйцеклеток, например, при эндометриозе, неясном генезе бесплодия. Причиной могут быть аномалии в хромосомном наборе самих родителей.

Принято считать, что до 3 дня развития эмбрион живет и развивается на материнских запасах, то есть, остановка или ухудшение развития до 3 суток указывает на плохое качество яйцеклетки.

На 3 сутки развития начинает работать сам геном эмбриона. И здесь добавляются факторы, привнесенные в эмбрион сперматозоидом. К сожалению, очень многие отклонения от нормы в качестве сперматозоидов и хроматина внутри них оказывают влияние на развитие эмбриона и могут вызывать анеуплоидии или недостаточность генома эмбриона. Качество конденсации и организации ДНК сперматозоида является важным фактором развития эмбриона, даже при выполнении ИКСИ.

Но есть данные, что некоторое количество материнской мРНК сохраняется до стадии бластоцисты и может также участвовать в остановке развития.

Хромосомные аномалии, несомненно, вызывают большой процент потерь эмбрионов. Генетические факторы регулируют скорость предимплантационного развития эмбриона. Существует тенденция к увеличению количества анеуплоидных эмбрионов с увеличением возраста. Большая часть анеуплоидий летальна для эмбриона на ранних стадиях развития. Но некоторые анеуплоидии не мешают эмбриону стать бластоцистой хорошего качества, например, при трисомии по 21 хромосоме, или синдроме Дауна.

В связи с этим, пациентам позднего репродуктивного возраста рекомендуется проведение предимплантационного генетического скрининга до переноса эмбриона в полость матки.

Кроме того, у пар более молодого возраста, если в нескольких циклах ЭКО при переносе эмбриона хорошего качества на стадии бластоцисты в однородный, достаточной толщины и хорошо кровоснабжающийся эндометрий беременность не наступает, необходимо выполнение предимплантационного генетического скрининга на все хромосомы. И, соответсвенно, переносить в полость матки эмбрион только с полным хромосомным набором.

Источник

• ← Чем оплести качели гнездо
• Чем опломбировать автоматический выключатель iek →