Чем обусловлена кислотоустойчивость спор
КИСЛОТОУСТОЙЧИВЫЕ БАКТЕРИИ
Кислотоустойчивые бактерии — бактерии, устойчивые к кислотам, щелочам и спиртам; медленно воспринимающие анилиновые краски, грамположительные; окрашивающиеся в розовый цвет по методу Циля — Нельсена. Некислотоустойчивые особи окрашиваются при этом дополнительно в голубой цвет (см. Циля-Нельсена метод). После воздействия на них кислотами и щелочами, в отличие от других микроорганизмов, не теряют жизнеспособности. Это свойство обусловлено их особым хим. составом — высоким содержанием липидных соединений, входящих в состав сложных липопротеидных, липополисахаридных, липонуклеопротеидных комплексов и высокомолекулярных жирных кислот (миколовой и фтионовой), а также особенностями физической структуры протоплазмы. В механизме кислотоустойчивости играет роль хим. состав поверхностного слоя клетки, образованного большим количеством липидов, белками и полисахаридами; частичная деструкция клеточной стенки, связанная с утратой липидов и миколовой кислоты, приводит к потере кислотоустойчивости. Типичный представитель Кислотоустойчивых бактерий — Mycobacterium tuberculosis обладает широким полиморфизмом, образуя наряду с обычной кислотоустойчивой палочковидной формой зернистые варианты, некислотоустойчивые палочки, фильтрующиеся формы, гигантские ветвистые структуры с огромными палочковидными выпячиваниями и колбообразными вздутиями, что позволило отнести ее к роду микобактерий. Патогенные культуры более строго кислотоустойчивы, чем сапрофиты, и медленнее растут на питательных средах; отдельные их представители (M. leprae) вообще не растут на питательных средах и не заражают в эксперименте животных.
Библиография: Красильников Н. А. Актиномицеты — антагонисты и антибиотические вещества, М.—Л., 1950, библиогр.; Bergey’s manual of determinative bacteriology, ed. by R. E. Buchanan a. N. E. Gibbons, Baltimore, 1975, bibliogr.; Murohashi T. a. YoshidaK. Biological significance of acid-fastness of mycobacteria, Ann. N. Y. Acad. Sci., v. 154, p. 58, 1968.
Особенности кислотоустойчивых бактерий как экологического или лабораторного понятия
Несмотря на свое название, кислотоустойчивые бактерии предпочитают расти на нейтральных средах. Их устойчивость к перепадам кислотности внешней среды обусловлена особым строением клеточной стенки и составом клеточного содержимого. Окраска таких бактерий карболовым фуксином в красный цвет является очень стойкой – в результате кислотоустойчивые микроорганизмы не обесцвечиваются после обработки их раствором серной кислоты.
В данную группу входят различные таксоны – микобактерии, актиномицеты, бактерии, способные к азотфиксации. Таксономия выделяет их в отдельную межвидовую группу. Повышенной кислотоустойчивостью отличаются также споры ряда бактерий – спящие формы, окруженные плотной оболочкой и имеющие повышенную устойчивость к неблагоприятным условиям внешней среды. Процесс образования спор занимает у бактериальной колонии 18-20 часов, а просыпаются они при наступлении благоприятных условий за 4-5 часов.
Окрашивание
Интересно, что термин кислотоустойчивые бактерии применяется к микроорганизмам, не в плане их экологических особенностей, а в том смысле, что они окрашиваются по Цилю-Нильсену и не обесцвечиваются после окраски слабыми растворами кислот и этанолом. Эти методы позволяют успешно выявлять кислотоустойчивые формы в мазках. Однако обнаружены и такие особенности этих бактерий, как устойчивость к повышенному содержанию в среде кислот и щелочей. Кислотоустойчивые формы бактерий считаются грамположительными, поскольку таксономия этих организмов основана на толщине их стенок, которую демонстрирует окраска по Граму.
Стандартные методы окрашивания (например, окраска по Граму) не дают удовлетворительных результатов. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются по Граму, только если применяются большие концентрации красителей или высокие температуры. Такие препараты кислотоустойчивых бактерий можно длительно хранить.
Для выявления кислотоустойчивых бактерий в мазке применяют следующие препараты:
Окраска производится после фиксации стандартных препаратов на пламени. После этого на него накладывают фильтровальную бумагу, смоченную фуксином Циля, и нагревают стекло над пламенем 5 минут, не допуская закипания жидкости. Препарат не должен высыхать. После завершения фиксации его промывают большим количеством воды под малым напором.
После высыхания мазка его обрабатывают слабыми растворами серной или соляной кислоты и еще раз промывают водой. Заключительным этапом является окраска метиленовым синим (краситель Леффлера).
Окраска по Цилю-Нильсену является одним из методов выявления возбудителей туберкулеза и проказы. Таксономия относит их к числу грамположительных организмов.
Кислотоустойчивость и строение клетки
Наиболее часто бактерии, обладающие кислотоустойчивостью, микробиология описывает среди микобактерий и актиномицетов. Это связано с особенностью строения их клеточной стенки, содержащей миколовые кислоты, небольшое количество липидов, тейхоевых кислот, полисахаридов и полипептидов, а также воска. Используя методы выявления кислотоустойчивости, микробиологи узнали много нового о строении бактериальных спор и клеточной стенки.
Обнаружено сходство клеточных стенок кислотоустойчивых бактерий и бактериальных спор, обуславливающее их свойства.
Разновидности
Методы выявления кислотоустойчивости разрабатывались для патогенных микроорганизмов – возбудителей туберкулеза и проказы. Однако постепенно среди кислотоустойчивых бактерий обнаружились сапрофитные формы, обладающие аналогичными свойствами клеточной стенки. Они имеют ряд отличий (быстрый рост в культуре, более быстрое или, наоборот, медленное обесцвечивание этанолом), однако для их выявления применяются такие же методы.
Аналогичное строение клеточной стенки наблюдается у большинства актиномицетов. Эти малоизученные микроорганизмы всегда присутствуют в пристеночной микрофлоре человека и животных. В случае ослабления иммунной системы хозяина, они способны вызывать состояния, напоминающие туберкулез. Эти организмы умеют перерабатывать сложные среды, содержащие парафин, воск, смолу или керосин, производить витамин В12, биотин, рибофлавин, пантотеновую кислоту.
Интерес к актиномицетам стал причиной того, что методы выявления бактерий с характерной клеточной стенкой начали применяться не только для изучения патогенных и сапрофитных бактерий человека и животных. Так среди азотфиксирующих организмов были обнаружены бейеринкии (Beijerinckia), имеющие высокую устойчивость в средах с различной кислотностью. Выявлена неплохая кислотоустойчивость у некоторых азотфиксирующих клостридиумов (Clostridium). Исследования с применением изотопов позволили выявить азотфиксирующие формы среди актиномицетов (Actinomyces).
Работаю врачом ветеринарной медицины. Увлекаюсь бальными танцами, спортом и йогой. В приоритет ставлю личностное развитие и освоение духовных практик. Любимые темы: ветеринария, биология, строительство, ремонт, путешествия. Табу: юриспруденция, политика, IT-технологии и компьютерные игры.
Кислотоустойчивые бактерии по Цилю Нильсену: метод окраски
Несмотря на свое название, кислотоустойчивые бактерии предпочитают расти на нейтральных средах. Их устойчивость к перепадам кислотности внешней среды обусловлена особым строением клеточной стенки и составом клеточного содержимого.
Окраска таких бактерий карболовым фуксином в красный цвет является очень стойкой – в результате кислотоустойчивые микроорганизмы не обесцвечиваются после обработки их раствором серной кислоты.
Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, некислотоустойчивые – в синий
В данную группу входят различные таксоны – микобактерии, актиномицеты, бактерии, способные к азотфиксации. Таксономия выделяет их в отдельную межвидовую группу. Повышенной кислотоустойчивостью отличаются также споры ряда бактерий – спящие формы, окруженные плотной оболочкой и имеющие повышенную устойчивость к неблагоприятным условиям внешней среды. Процесс образования спор занимает у бактериальной колонии 18-20 часов, а просыпаются они при наступлении благоприятных условий за 4-5 часов.
Окрашивание
Интересно, что термин кислотоустойчивые бактерии применяется к микроорганизмам, не в плане их экологических особенностей, а в том смысле, что они окрашиваются по Цилю-Нильсену и не обесцвечиваются после окраски слабыми растворами кислот и этанолом. Эти методы позволяют успешно выявлять кислотоустойчивые формы в мазках. Однако обнаружены и такие особенности этих бактерий, как устойчивость к повышенному содержанию в среде кислот и щелочей.
Кислотоустойчивые формы бактерий считаются грамположительными, поскольку таксономия этих организмов основана на толщине их стенок, которую демонстрирует окраска по Граму.
Стандартные методы окрашивания (например, окраска по Граму) не дают удовлетворительных результатов. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются по Граму, только если применяются большие концентрации красителей или высокие температуры. Такие препараты кислотоустойчивых бактерий можно длительно хранить.
Для выявления кислотоустойчивых бактерий в мазке применяют следующие препараты:
Окраска производится после фиксации стандартных препаратов на пламени. После этого на него накладывают фильтровальную бумагу, смоченную фуксином Циля, и нагревают стекло над пламенем 5 минут, не допуская закипания жидкости. Препарат не должен высыхать. После завершения фиксации его промывают большим количеством воды под малым напором.
После высыхания мазка его обрабатывают слабыми растворами серной или соляной кислоты и еще раз промывают водой. Заключительным этапом является окраска метиленовым синим (краситель Леффлера).
Окраска по Цилю-Нильсену является одним из методов выявления возбудителей туберкулеза и проказы. Таксономия относит их к числу грамположительных организмов.
Кислотоустойчивость и строение клетки
Наиболее часто бактерии, обладающие кислотоустойчивостью, микробиология описывает среди микобактерий и актиномицетов. Это связано с особенностью строения их клеточной стенки, содержащей миколовые кислоты, небольшое количество липидов, тейхоевых кислот, полисахаридов и полипептидов, а также воска. Используя методы выявления кислотоустойчивости, микробиологи узнали много нового о строении бактериальных спор и клеточной стенки.
Обнаружено сходство клеточных стенок кислотоустойчивых бактерий и бактериальных спор, обуславливающее их свойства.
Разновидности
Методы выявления кислотоустойчивости разрабатывались для патогенных микроорганизмов – возбудителей туберкулеза и проказы. Однако постепенно среди кислотоустойчивых бактерий обнаружились сапрофитные формы, обладающие аналогичными свойствами клеточной стенки. Они имеют ряд отличий (быстрый рост в культуре, более быстрое или, наоборот, медленное обесцвечивание этанолом), однако для их выявления применяются такие же методы.
Аналогичное строение клеточной стенки наблюдается у большинства актиномицетов. Эти малоизученные микроорганизмы всегда присутствуют в пристеночной микрофлоре человека и животных. В случае ослабления иммунной системы хозяина, они способны вызывать состояния, напоминающие туберкулез.
Эти организмы умеют перерабатывать сложные среды, содержащие парафин, воск, смолу или керосин, производить витамин В12, биотин, рибофлавин, пантотеновую кислоту.
Интерес к актиномицетам стал причиной того, что методы выявления бактерий с характерной клеточной стенкой начали применяться не только для изучения патогенных и сапрофитных бактерий человека и животных.
Так среди азотфиксирующих организмов были обнаружены бейеринкии (Beijerinckia), имеющие высокую устойчивость в средах с различной кислотностью. Выявлена неплохая кислотоустойчивость у некоторых азотфиксирующих клостридиумов (Clostridium). Исследования с применением изотопов позволили выявить азотфиксирующие формы среди актиномицетов (Actinomyces).
Способы окраски бактерий
Простой метод окраски
Препарат помещают на подставку для окраски, исследуемым материалом вверх. Пипеткой наносят на него раствор красителя. По истечении указанного времени краситель осторожно сливают, препарат промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. При простом методе используют один краситель. Метиленовым синим и щелочным синим Леффлера окрашивают препарат в течение 3-5 мин, фуксином Пфейффера — 1-2 мин.
На окрашенный и высушенный препарат наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с помощью иммерсионной системы.
Сложные методы окраски
Окраска по Граму (универсальный метод). Наиболее распространенным методом дифференциальной окраски является окраска по Граму.
В зависимости от результатов окраски все микроорганизмы делят на две группы — грамположительные и грамотрицательные.
Грамположительные бактерии содержат в клеточной стенке магниевую соль РНК, которая образует комплексное соединение с йодом и основным красителем (генциановым, метиловым или кристаллическим фиолетовым). Этот комплекс не разрушается при действии спирта, и бактерии сохраняют фиолетовый цвет.
Грамотрицательные бактерии не способны удержать основной краситель, так как не содержат магниевой соли РНК. Под действием спирта краситель вымывается, клетки обесцвечиваются и окрашиваются дополнительным красителем (фуксином) в красный цвет.
Микроскопируют с помощью иммерсионной системы.
Окраска по Цилю — Нильсену (для кислотоустойчивых бактерий). Этот метод применяют для выявления бактерий туберкулеза и проказы, имеющих в оболочке клеток большое количество липидов, воска и оксикислот. Бактерии кислото-, щелоче- и спиртоустойчивы. Для увеличения проницаемости клеточной стенки первый этап окрашивания проводят при подогревании.
Микроскопируют с помощью иммерсионной системы.
Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные — в синий.
Окраска по Ожешко (выявление спор).
Окраска по Бурри — Гинсу (выявление капсулы). Этот метод назван негативным, так как окрашивается фон препарата и бактериальная клетка, а капсула остается неокрашенной.
Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат.
Микроскопируют с помощью иммерсионной системы. Фон препарата черный, клетки — красные, капсулы — неокрашенные.
Прижизненная окраска микроорганизмов
Для изучения живой культуры используют чаще всего метиленовый синий и другие красители в больших разведениях (1:10000). Каплю исследуемого материала смешивают на предметном стекле с каплей красителя и накрывают покровным стеклом. Микроскопируют с помощью объектива 40×.
Изучение подвижности микроорганизмов
Для исследования используют культуру бактерий, выращенных в жидкой питательной среде, или взвесь бактерий в изотоническом растворе натрия хлорида.
Метод раздавленной капли. На предметное стекло наносят пипеткой каплю культуры и покрывают ее покровным стеклом. Чтобы не образовывалось пузырьков воздуха, покровное стекло подводят ребром к краю капли и резко опускают его. Для предохранения препарата от высыхания его помещают во влажную камеру.
Влажная камера представляет собой чашку Петри, на дне которой находится влажная фильтровальная бумага. На бумагу кладут две спички и на них помещают препарат. Чашку закрывают крышкой.
Микроскопируют при увеличении объектива 40х в темном поле).
Метод висячей капли. Для приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло и вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина.
На покровное стекло наносят каплю культуры. Затем осторожно накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре. Склеившиеся стекла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время. При микроскопии сначала при малом увеличении (8×) находят край капли, а затем проводят изучение препарата при большом увеличении.
Победить паразитов можно!
Сейчас действует льготная программа на бесплатную упаковку. Читать мнение экспертов.
Морфологические свойства и строение бактериальной клетки
Микобактерии туберкулеза: форма, исследования, устойчивость, анализы
Аскариды: размеры, окраска, характер движений, форма яиц и личинок
Актиномицеты: морфология, особенности строения, среда обитания
Замкнутая кровеносная система аскариды или нет, описание и строение аскариды человеческой
Глисты и алкоголь: как спирт влияет на паразитов и как много его нужно, чтобы их убить
Список литературы
Лучшие истории наших читателей
Тема: Во всех бедах виноваты паразиты!
От кого: Людмила С. ([email protected])
Кому: Администрации Noparasites.ru
Не так давно мое состояние здоровья ухудшилось. Начала чувствовать постоянную усталость, появились головные боли, лень и какая-то бесконечная апатия. С ЖКТ тоже появились проблемы: вздутие, понос, боли и неприятный запах изо рта.
Думала, что это из-за тяжелой работы и надеялась, что само все пройдет. Но с каждым днем мне становилось все хуже. Врачи тоже ничего толком сказать не могли. Вроде как все в норме, но я-то чувствую, что мой организм не здоров.
Решила обратиться в частную клинику. Тут мне посоветовали на ряду с общими анализами, сдать анализ на паразитов. Так вот в одном из анализов у меня обнаружили паразитов. По словам врачей – это были глисты, которые есть у 90% людей и заражен практически каждый, в большей или меньшей степени.
Мне назначили курс противопаразитных лекарств. Но результатов мне это не дало. Через неделю мне подруга прислала ссылку на одну статью, где какой-то врач паразитолог делился реальными советами по борьбе с паразитами. Эта статья буквально спасла мою жизнь. Я выполнила все советы, что там были и через пару дней мне стало гораздо лучше!
Улучшилось пищеварение, прошли головные боли и появилась та жизненная энергия, которой мне так не хватало. Для надежности, я еще раз сдала анализы и никаких паразитов не обнаружили!
Кислотоустойчивые бактерии
Разновидности
Методы выявления кислотоустойчивости разрабатывались для патогенных микроорганизмов – возбудителей туберкулеза и проказы. Однако постепенно среди кислотоустойчивых бактерий обнаружились сапрофитные формы, обладающие аналогичными свойствами клеточной стенки. Они имеют ряд отличий (быстрый рост в культуре, более быстрое или, наоборот, медленное обесцвечивание этанолом), однако для их выявления применяются такие же методы.
Аналогичное строение клеточной стенки наблюдается у большинства актиномицетов. Эти малоизученные микроорганизмы всегда присутствуют в пристеночной микрофлоре человека и животных. В случае ослабления иммунной системы хозяина, они способны вызывать состояния, напоминающие туберкулез. Эти организмы умеют перерабатывать сложные среды, содержащие парафин, воск, смолу или керосин, производить витамин В12, биотин, рибофлавин, пантотеновую кислоту.
Интерес к актиномицетам стал причиной того, что методы выявления бактерий с характерной клеточной стенкой начали применяться не только для изучения патогенных и сапрофитных бактерий человека и животных. Так среди азотфиксирующих организмов были обнаружены бейеринкии (Beijerinckia), имеющие высокую устойчивость в средах с различной кислотностью. Выявлена неплохая кислотоустойчивость у некоторых азотфиксирующих клостридиумов (Clostridium). Исследования с применением изотопов позволили выявить азотфиксирующие формы среди актиномицетов (Actinomyces).
Окрашивание
Интересно, что термин кислотоустойчивые бактерии применяется к микроорганизмам, не в плане их экологических особенностей, а в том смысле, что они окрашиваются по Цилю-Нильсену и не обесцвечиваются после окраски слабыми растворами кислот и этанолом. Эти методы позволяют успешно выявлять кислотоустойчивые формы в мазках. Однако обнаружены и такие особенности этих бактерий, как устойчивость к повышенному содержанию в среде кислот и щелочей. Кислотоустойчивые формы бактерий считаются грамположительными, поскольку таксономия этих организмов основана на толщине их стенок, которую демонстрирует окраска по Граму.
Стандартные методы окрашивания (например, окраска по Граму) не дают удовлетворительных результатов. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются по Граму, только если применяются большие концентрации красителей или высокие температуры. Такие препараты кислотоустойчивых бактерий можно длительно хранить.
Для выявления кислотоустойчивых бактерий в мазке применяют следующие препараты:
Окраска производится после фиксации стандартных препаратов на пламени. После этого на него накладывают фильтровальную бумагу, смоченную фуксином Циля, и нагревают стекло над пламенем 5 минут, не допуская закипания жидкости. Препарат не должен высыхать. После завершения фиксации его промывают большим количеством воды под малым напором.
После высыхания мазка его обрабатывают слабыми растворами серной или соляной кислоты и еще раз промывают водой. Заключительным этапом является окраска метиленовым синим (краситель Леффлера).